UDC 543?632.95]?636.085/.087

V.D. Chmil, biologian tohtori

TORJUNTIJAJÄÄMIEN ANALYYSIMENETELMIEN NYKYISET SUUNTAUKSET
(perustuu 10. kansainvälisen IUPAC-kongressin materiaaleihin
kasvinsuojelukemiassa)

Ekohygienian ja toksikologian instituutti nimetty. L.I. Karhu, Kiova

Kansainvälinen kasvinsuojelukemian kongressi pidettiin 4.-9. elokuuta 2002 Baselissa (Sveitsi) Kansainvälisen puhtaan ja sovelletun kemian liiton (IUPAC) suojeluksessa (vuoteen 1998 asti tämä kongressi tunnettiin nimellä IUPAC Congress on Pesticide Chemistry ). Tämä kongressi järjestetään joka neljäs vuosi ja on yksi merkittävistä tapahtumista kemiallisten kasvinsuojeluaineiden synteesin, käytön ja valvonnan alalla eri maiden ja tieteenalojen asiantuntijoiden kokouskalenterissa.

Kongressin tieteellinen ohjelma koostui yhdestä täysistunnosta ja kuudesta jaostoistunnosta sekä yli 20 posteriistunnosta, joissa käsiteltiin kasvinsuojeluaineiden kemian, biokemian ja molekyylibiologian ongelmia tauteja, rikkaruohoja ja tuholaisia ​​vastaan, torjunta-ainevalmisteita ja niiden käyttöä, kohtaloa. torjunta-aineiden käyttäytyminen ympäristössä ja niiden turvallinen käyttö, torjunta-ainejäämät ja kuluttajien turvallisuus.

Kongressin aiheet, jotka liittyivät torjunta-ainejäämien analysointimenetelmien nykyiseen kehitykseen ja jotka heijastuivat tilatuissa osaraporteissa ja julisteissa, käsittelivät seuraavia asioita:
- näytteiden ja standardiliuosten varastointi;
- näytteiden valmistelu analyysiä varten;
- louhinta;
- uutteiden puhdistus;
- torjunta-ainejäämien määrittäminen:
a) kaasu-nestekromatografia (GLC);
b) korkean erotuskyvyn nestekromatografia (HPLC) ja kapillaarielektroforeesi;
c) ohutkerroskromatografia;
d) immunokemiallinen analyysi;
- torjunta-ainejäämien havaitseminen;
- menetelmät useiden torjunta-ainejäämien analysoimiseksi;
- polykloorattujen dibentsodioksiinien (PCDD) ja polykloorattujen dibentsofuraanien (PCDF) määritys;
- automaattiset analysaattorit.

Näytteiden ja standardiliuosten säilytys. Hyvin usein kerättyjä torjunta-ainejäämiä sisältäviä näytteitä säilytetään jonkin aikaa ennen analysointia. On tärkeää, että torjunta-ainejäämät eivät hajoa varastoinnin aikana. Tutkittaessa valittujen ilmanäytteiden säilyvyyttä lasikuitusuodattimella sekä lasikuitu- ja XAD-2-hartsisuodattimella, joka sisälsi 9 karbamaattitorjunta-ainetta 28 päivän ajan, osoitettiin, että karbofuraani, isoprokarbi, metomyyli ja tiodikarbi olivat stabiileja 28 päivää, karbaryyli- ja oksamyyli olivat stabiileja 14 päivää ja metiokarbi ja propopoksuuri olivat stabiileja 7 päivää.

Tärkeä tekijä torjunta-ainejäämien analysoinnissa on torjunta-ainevalmisteiden aktiivisten aineosien stabiilisuus standardiliuosten varastoinnin aikana. Esimerkiksi käyttämällä HPLC:tä havaittiin, että tribenuron-metyylin liuoksia asetonissa, etyyliasetaatissa ja asetonitriilissä voidaan säilyttää -20 °C:ssa hajoamatta 2 kuukautta. Samojen liuosten säilytys 25 °C:ssa viikon ja kahden kuukauden ajan johti tribenuronimetyylin hajoamiseen 16-24 % ja 82-98 %, vastaavasti. Samojen liuosten säilyttäminen 5 °C:ssa johti 0,5 % tribenuronimetyylin hajoamiseen viikon kuluttua ja noin 4 % kahden kuukauden kuluttua.

Näytteiden valmistelu analyysiä varten. Ennen kuin osa laboratorioon toimitetusta näytteestä otetaan analysoitavaksi, näytemateriaali on homogenisoitava. Tämä toimenpide suoritetaan murskaamalla, jauhamalla, jauhamalla tai sekoittamalla näyte. Valitettavasti kotimaisessa tutkimuksessa, joka koskee torjunta-aineiden mikromäärien mittaustekniikoiden (MME) kehittämistä ja MME:n käyttöä torjunta-ainejäämien määrittämiseen esimerkiksi vihanneksissa ja hedelmissä, näytteiden valmistusmenetelmälle ei aina kiinnitetä asianmukaista merkitystä jatkoa varten. analyysi ja laitteet, joita tässä operaatiossa tulisi käyttää. Riittämättä murskattu ja homogenisoitu näyte ei mahdollista edustavan näytteen ottamista analyysiä varten, ja se johtaa analysoitujen torjunta-aineiden talteenoton (uuttoon) pieneen prosenttiosuuteen. Esimerkiksi kasvinäytteiden valmistusmenetelmien vertailu määritettäessä mankotsebiä sähköhakkurilla (800 rpm) ja manuaalisesti saksilla pilkkottaessa osoitti, että lisättyjen mankotsebimäärien palautus oli 93 % ja 67 %.

Johdanto

Luku 1. Olemassa olevat menetelmät torjunta-aineiden pitoisuuden määrittämiseksi analysoiduista kohteista (kirjallisuuskatsaus)

1.1. Näytteen valmistelu kiinteäfaasiuutolla 6

1.2. Menetelmät torjunta-aineiden kvalitatiiviseen karakterisointiin 16

1.3. Torjunta-aineiden kvantitatiivinen analyysi 20

Luku 2. Tekniikka ja koeolosuhteet

2.1. Torjunta-aineiden jakautumiskertoimien määritys heksaani/asetonitriilijärjestelmässä kaasu-neste- ja käänteisfaasi-suuren erotuskyvyn nestekromatografialla 24

2.2. Torjunta-aineiden uuttoasteen määrittäminen mallivesiliuoksista kiinteäfaasiuutolla 30

2.3. Torjunta-aineiden lineaaristen logaritmien retentioindeksien ja suhteellisten optisten tiheysten määritys käänteisfaasin korkean suorituskyvyn nestekromatografiassa 32

2.4. Kasviesineiden torjunta-ainepitoisuuden kvantitatiivinen arviointi ulkoisilla standardi- ja vakiolisäainemenetelmillä 34

2.5. Torjunta-ainepitoisuuden määrittäminen todellisissa kasvilajeissa.39

Luku 3. Torjunta-aineiden uuttamisasteen arviointi mallivesiliuoksista kiinteän faasin uutto-olosuhteissa perustuen niiden jakautumiskertoimiin heksaani/asetonitriilijärjestelmässä ja hydrofobisuusparametreihin

3.1. Käänteisfaasin korkean erotuskyvyn nestekromatografian käytön piirteet torjunta-aineiden jakautumiskertoimien määrittämisessä heksaani/asetonitriilijärjestelmässä 42

3.2. Mahdollisten orgaanisten fosforipitoisten torjunta-aineiden hydrofobisuusparametrien arviointi niiden retentioindeksien perusteella korkean erotuskyvyn käänteisfaasinestekromatografiassa 48

3.3. Torjunta-aineiden uuttamisasteen välinen suhde vesiliuoksista kiinteän faasin uuton aikana ja niiden kertoimien välillä oktanoli/vesi- ja heksaani/asetonitriilisysteemeissä 59

Luku 4. Kasviaineissa olevien torjunta-aineiden tunnistamisen ja kvantifioinnin tulosten tulkinta

4.1. Optimaalisten analyyttisten parametrien valinta torjunta-aineiden kromatografiseen karakterisointiin 63

4.2. Ulkoisten standardien ja standardilisäainemenetelmien vertailu kasvituotteiden torjunta-ainepitoisuuden arvioimiseksi 71

Viitteet 92

Hakemukset 105

Johdatus työhön

Kemiallisten kasvinsuojeluaineiden laaja käyttö nostaa torjunta-aineiden analysoinnin maataloustuotteissa ja ympäristökohteissa ympäristöanalyyttisen valvonnan prioriteettitehtäviin. Tältä osin sekä Rostekhregulirovanie-yhtiön valvontamenetelmille asettamien uusien vaatimusten vuoksi on tarpeen parantaa vanhoja ja kehittää uusia menetelmiä torjunta-aineiden mikromäärien määrittämiseen [käyttämällä kaasu-nestekromatografiaa (GLC) ja korkean suorituskyvyn nestekromatografiaa ( HPLC), joka yhdistäisi määritysmenettelyn yksinkertaisuuden ja saatujen tulosten maksimaalisen luotettavuuden. Uudet lähestymistavat ekomyrkyllisten aineiden jäämien määrittämiseen voivat auttaa ratkaisemaan tämän ongelman onnistuneesti.

Torjunta-aineanalyysin tärkeimmät vaiheet ovat: näytteen valmistelu ja tietojen lopullinen tulkinta, mukaan lukien analysoitujen yhdisteiden kvalitatiivinen ja kvantitatiivinen karakterisointi. Näytteen valmistelu analyysiä varten koostuu tyypillisesti uuttamisesta, uudelleenuutosta ja pylväspuhdistuksesta. Kiinteän faasin uutto (SPE) on vaihtoehtoinen lähestymistapa sen toteuttamiseen. Se yhdistää useita edellä mainittuja toimenpiteitä yhdeksi, mikä säästää aikaa ja reagensseja. SPE-prosessin optimoimiseksi tarvitaan kuitenkin tietoa kohdeaineista, erityisesti niiden jakautumiskertoimista heterofaasisissa liuotinjärjestelmissä 1-oktanoli/vesi (log P) ja heksaani/asetonitriili (K p). Torjunta-aineita koskevassa viitekirjallisuudessa on muiden fysikaalis-kemiallisten ominaisuuksien ohella annettu torjunta-aineiden log P -arvot. Niiden määrittelyongelma on kuitenkin edelleen ajankohtainen määrittelyprosessissa esiintyvien vaikeuksien vuoksi. Pääasiallinen on

molempien liuottimien hitaasti erottuvien emulsioiden muodostuminen keskenään. Tämä heijastuu torjunta-aineiden log P -arvojen alhaisena laboratorioiden välisenä toistettavuutena. Siksi näyttää tärkeältä karakterisoida systemaattisesti eri kemiallisten ryhmien torjunta-aineet, ensisijaisesti niiden jakautumiskertoimet oktanoli/vesi- ja heksaani/asetonitriilisysteemeissä sekä retentioindeksit käänteisfaasin korkean suorituskyvyn nestekromatografiassa [RP (HPLC)]. Jälkimmäistä voidaan käyttää paitsi analysoitavien yhdisteiden tunnistamiseen, myös niiden hydrofobisuusparametrien arvioimiseen. Tällaisen tietokannan laajentaminen torjunta-aineiden fysikaalis-kemiallisista ominaisuuksista ja karakterisoitujen yhdisteiden valikoimasta auttaa toisaalta näytteen valmistuksen täydessä suorittamisessa ja toisaalta niiden tunnistamisessa. Yksiselitteisen ja luotettavan laadullisen ominaisuuden saavuttamiseksi yksi käytettävissä olevista parametreista ei kuitenkaan riitä. On tarpeen arvioida torjunta-aineiden erilaisten analyyttisten parametrien yhdistelmien tietosisältö, mikä mahdollistaa niiden tunnistamisongelman ratkaisemisen mahdollisimman luotettavasti.

Viimeinen analyysivaihe näytteiden valmistelun ja analysoitujen yhdisteiden kvalitatiivisen karakterisoinnin jälkeen on niiden pitoisuuksien kvantitatiivinen arviointi tutkituissa näytteissä. Nykyisiä torjunta-aineiden kvantitatiivisen kromatografisen analyysin menetelmiä (absoluuttinen kalibrointi, sisäinen standardimenetelmä) ei voida kutsua optimaaliseksi. Absoluuttinen kalibrointimenetelmä, jossa esiintyy systemaattisia virheitä näytteen valmistelussa (yleensä johtuen etsittyjen aineiden häviöistä eri vaiheissa) ilman korjauskertoimia, johtaa aliarvioituihin tuloksiin, ja sisäisen standardin menetelmän käyttö rajoittuu etsintään. vaadittavalle standardiyhdisteelle ja alustava, työvoimavaltainen lisämenettely erityistä näytteen valmistelua varten määrityksen suorittamiseksi.

6 Näin ollen tämän työn tarkoituksena oli parantaa olemassa olevia ja kehittää uusia menetelmiä torjunta-aineiden määrittämiseen kasveista. Tämän ongelman ratkaisemiseksi on tarpeen optimoida jokainen torjunta-aineanalyysin päävaihe. Ehdotettu optimointi sisältää: SPE:n käytön näytteen valmisteluvaiheessa ja tietojen lopullisen tulkinnan aikana - optimaalisimman analyyttisten parametrien yhdistelmän valinnan torjunta-aineiden kromatografiseen tunnistamiseen sekä torjunta-aineiden valinnan ja käytön. menetelmä niiden kvantitatiiviseen arviointiin, mikä mahdollistaa systemaattisten virheiden minimoimisen määrityksissä.

Menetelmät torjunta-aineiden kvalitatiiviseen karakterisointiin

Torjunta-aineiden (sekä kaikkien muiden orgaanisten aineiden) tunnistaminen kromatografisen analyysin (GLC ja HPLC) aikana suoritetaan usein retentioparametreilla [absoluuttiset ja suhteelliset retentioajat, retentioindeksit (lineaarinen, logaritminen, lineaarinen logaritminen)] eri vaiheissa. polariteetit (GLC ) tai eri eluointimuodot (HPLC). Torjunta-aineiden kvalitatiivisen analyysin suorittaminen absoluuttisina aikoina suoritetaan tiukasti määritellyissä olosuhteissa, samalla instrumentilla käyttäen tarvittavia standardi- (vertailu)yhdisteitä. Suhteelliset retentioajat (retentioajat suhteessa johonkin standardiaineeseen) ovat vähemmän riippuvaisia ​​erityisistä analyysiolosuhteista. Ne ovat huomattavasti paremmin toistettavissa isotermisissä erotusolosuhteissa (GLC) ja isokraattisissa eluutioolosuhteissa (HPLC). Niiden avulla voidaan vertailla eri paikallaan olevissa olosuhteissa, eri instrumenteilla, eri laboratorioissa saatuja tietoja. Pysyvien faasien (GLC), kolonnien tyypin ja eluentin koostumuksen (HPLC) on kuitenkin pysyttävä muuttumattomina. Vakioyhteydeksi on suositeltavaa valita samaan luokkaan kuuluva yhteys kuin määritettävä. Jos retentioparametrit (retentioindeksit (RI)) määritetään suhteessa kahteen standardiin, joista toisella on lyhyempi ja toisella pidempi retentioaika kuin halutulla yhdisteellä, niille on tunnusomaista vielä suurempi laboratorioiden välinen toistettavuus kuin suhteelliset retentioajat. Retentioindeksit voidaan esittää lineaarisessa, logaritmisessa ja lineaari-logaritmisessa muodossa. Logaritmisessa muodossa olevia retentioindeksejä käytetään isotermisessä tilassa (GLC) tai isokraattisessa eluointitilassa (HPLC). Monimutkaisten seosten analysoinnissa ohjelmoidun kolonnin lämpötilan muutoksen (GLC) olosuhteissa käytetään lineaarisia retentioindeksejä. Kuitenkin, kuten parhaassa muodossa esitetään retentioparametrit näissä olosuhteissa, ovat lineaari-logaritminen retentioindeksit. Niiden etuna on korkea toistettavuus sekä lineaarisessa lämpötilaohjelmointitilassa ja isotermisessä tilassa (GLC), että liikkuvan faasin erilaisissa eluointimuodoissa (isokraattinen, gradientti) HPLC:ssä. Retentioindeksit ovat löytäneet käyttöä paitsi torjunta-aineiden, myös muiden orgaanisten epäpuhtauksien analysoinnissa. Kromatografisten retentioparametrien käyttöön liittyy kuitenkin epäselvyyksiä arvioinnissa. Tämä johtuu niiden todellisesta mahdollisuudesta, että ne vastaavat näytteessä tavallisesti läsnä olevien rinnakkaisuuttoaineiden retentioparametreja (kouuttoaineet ovat yhdisteitä, jotka uutetaan matriisista yhdessä analyytin kanssa).

Toinen menetelmä aineiden tunnistamiseksi perustuu selektiivisten ilmaisimien käyttöön. Torjunta-aineiden kaasukromatografinen analyysi suoritetaan kolmella valikoivalla detektorilla - typpi-, fosfori- ja rikkipitoisten yhdisteiden analysoinnissa käytetään termionisia ja liekkifotometrisia ilmaisimia ja halogeenipitoisten yhdisteiden analysoinnissa elektroninsieppausdetektoria. aineita. Vaihtoehtoisten ilmaisimien käyttöä rajoittaa se, että vaikka jotkut niistä on rekisteröity vaaditulla herkkyydellä. Torjunta-aineiden analyysi käänteisfaasi-HPLC-olosuhteissa suoritetaan lähes yhdellä selektiivisellä ultravioletti (UV)-detektorilla, jonka selektiivisyyttä ohjataan kiinteiden aallonpituuksien valinnalla. Diodiryhmien käyttö mahdollistaa absorption tallentamisen useilla aallonpituuksilla, mikä tarjoaa suuremman todennäköisyyden torjunta-aineiden kvalitatiiviselle karakterisoinnille.

Yksi luotettavimmista tavoista tunnistaa ekomyrkylliset aineet ovat hybridimenetelmät, jotka perustuvat analysoitujen aineiden kromatografiseen erotteluun ja myöhempään tunnistamiseen spektraalisilla (massa-, infrapuna-, atomiemissio-) ilmaisimilla. Tässä tapauksessa määritetyillä retentioparametreilla varustettujen kromatogrammien lisäksi rekisteröidään yhdisteiden vastaavat spektrit (massa-, infrapuna-, atomiemissio). Kuitenkin, kuten julkaisussa todetaan, "mikään tunnettu analyyttinen menetelmä ei voi taata yhdisteiden luotettavaa tunnistamista." On lisättävä, että hybridimenetelmien käyttöä rajoittavat kalliit laitteet.Kunkin torjunta-aineiden kvalitatiiviseen karakterisointiin käytetyn menetelmän edut ja rajoitukset on havainnollistettu taulukossa 1.2.

Torjunta-aineiden lineaaristen logaritmien retentioindeksien ja suhteellisten optisten tiheysten määritys käänteisfaasin korkean suorituskyvyn nestekromatografiassa

Työssä käytettiin torjunta-aineita, joiden luettelo on esitetty taulukossa 2.1, sekä yhdisteitä (1-23), joilla on yleinen rakennekaava RRP(=X)SR (taulukko 2.2.), jotka on syntetisoitu Organoelement Compounds -instituutissa ( Moskova), fysikaalis-kemialliset ominaisuudet, jotka on karakterisoitu. Yhdisteiden erotus käänteisfaasi-HPLC:llä suoritettiin Watersin nestekromatografilla Nova-Pac Qg -kolonnilla (3,9 x 150 mm) ja UV-detektiolla aallonpituuksilla 220 ja 254 nm. Liikkuvana faasina käytettiin asetonitriilin ja veden seosta, eluentin virtausnopeus oli 1 ml/min. Analyysi suoritettiin gradienttieluointitilassa CH3CN:n alkupitoisuuden ollessa 10 % ja muutosnopeudella 1,5 % minuutissa. Järjestelmän kuollut aika määritettiin annostelemalla kaliumbromidiliuosta (220 nm). Retentioajat kirjattiin Millennium-ohjelmistolla. RI-arvojen määrittämiseksi näytteisiin lisättiin seos referenssi-n-alkyylifenyyliketoneja PhCOCnH2n+i (n = 1-3,5). Lineaariset log-retentioindeksit [RI(HPLC)] laskettiin käyttämällä ohjekirjassa annettua ohjelmaa (QBasic). RI-arvojen (HPLC) laskemiseksi yhdisteille, joiden retentioajat ovat lyhyemmät kuin ensimmäisen vertailukomponentin (asetofenonin), retentioajan ekstrapolointialgoritmi, joka on kuvattu kohdassa . Suhteellisten optisten tiheyksien Aotn = A(254)/A(220) määrittämiseksi kromatogrammit tallennettiin rinnakkain kahdella ilmoitetulla aallonpituudella, minkä jälkeen laskettiin piikin pinta-alasuhteet Aotn = S(254)/S(220). Lineaarisen regressioyhtälön, jonka muoto on: log P = al +b, parametrien laskeminen, missä / ovat aineiden retentioindeksit käänteisfaasi-HPLC:ssä, a, b ovat yhtälön kertoimet; suoritettu Origin for Windows -ohjelmistolla.

Log P -arvojen arviot additiivisilla menetelmillä (perustuu molekyylifragmenttien log P -lisäyksiin) suoritettiin ACD- ja CS ChemDraw Ultra -ohjelmistoilla. Kasviesineiden [kurkut (pakastetut), oljet, tähkät, jyvät] torjunta-ainepitoisuuden kvantitatiivisen arvioinnin piirteet karakterisoitiin kolmen yhdisteen esimerkillä: dimetoaatti, pirimikarbi ja malationi. Torjunta-aineiden standardiliuokset asetonissa (reagenssilaatu), joiden pitoisuus oli 0,1 mg/ml (ja 0,01 mg/ml dimetoaatille), valmistettiin laimentamalla alkuperäiset varastoliuokset pitoisuudella 1 mg/ml ja lisättiin mahdollisimman tasaisesti ( 1-2,5 ml) käsittelemättömiin (kontrolli-) kasvinäytteisiin, jonka jälkeen ravistetaan ja sekoitetaan 5 minuuttia. Havaittavien torjunta-aineiden puuttuminen kontrollinäytteistä varmistettiin kokeellisesti käyttämällä Näytteen valmistelu jatkokromatografista analyysiä varten suoritettiin kahdella tavalla: LLE:llä (kurkut, oljet, tähkät, jyvät) ja käyttämällä SPE:tä (kurkut) Näytteen valmistelu nesteuutolla. . Dimetoaattia ja malationia sisältävien näytteiden valmistus suoritettiin organofosforitorjunta-aineiden ryhmämääritysmenetelmän mukaisesti. Se sisälsi torjunta-aineiden uuttamisen kurkkunäytteistä 50-prosenttisella vesipitoisella asetonilla (ultraäänihaudetta käytettiin uuttotehokkuuden lisäämiseksi).

Saadut uutteet suodatettiin paperisuodattimen läpi. Suodatinkakku pestiin 50-prosenttisella vesipitoisella asetonilla. Torjunta-aineiden toistuva uutto vesipitoisista asetoniliuoksista suoritettiin dikloorimetaanilla (kolme kertaa 30 ml kumpikin). Dikloorimetaaniliuokset kuivattiin johtamalla ne vedettömän natriumsulfaattikerroksen (analyyttinen laatu) läpi ja haihdutettiin kuiviin vetokaapissa huoneenlämpötilassa ilmavirrassa. Kuiva jäännös liuotettiin 10 ml:aan heksaania ja kromatografoitiin. Pirimikarbia sisältävien näytteiden valmistus suoritettiin kohdassa annettua menettelyä käyttäen. Se perustuu torjunta-aineen uuttamiseen analysoiduista kohteista 0,1 N suolahappoliuoksella. Saadut uutteet alkalisoitiin 1 N natriumhydroksidiliuoksella pH-arvoon 8-10 ja uutettiin uudelleen pirimikarbikloroformilla (kaksi 75 ml:n annosta). Kloroformiuutteet kuivattiin johtamalla ne vedettömän natriumsulfaattikerroksen läpi ja haihdutettiin kuiviin vetokaapissa huoneenlämpötilassa ilmavirran alla. Kuiva jäännös liuotettiin 10 ml:aan heksaania ja kromatografoitiin. Näytteen valmistelu kiinteäfaasiuutolla. Analysoitujen näytteiden torjunta-aineet uutettiin 50-prosenttisella vesipitoisella asetonilla (ultraäänihauteessa). Asetonivesiliuosten suodattamisen ja suodatinkakun pesun (50 % asetonin vesiliuos) jälkeen asetoni yhdistetyistä uutteista haihdutettiin täysin. Jäljelle jääneet vesiliuokset suodatettiin jälleen paperisuodattimen läpi. Ennen kotitaloussorbenttien Diapak C16 (erä nro 1002) käyttöä ne aktivoitiin (katso patruunoiden aktivointi edellä olevasta kappaleesta 2.2). Tämän jälkeen analysoidut vesiliuokset pumpattiin patruunoiden läpi enintään 2 ml/min nopeudella, jolloin vesisuihkupumpulla syntyi tyhjiö poistoaukkoon. Sitten patruunoita kuivattiin 30 minuuttia heliumvirrassa. Seuraavat eluointiliuottimet olivat heksaani (20 ml), dikloorimetaani (20 ml) ja asetoni (15 ml). Eluaatit haihdutettiin kuiviin vetokaapissa huoneenlämpötilassa.

Haihduttamisen jälkeen jääneet jäännökset liuotettiin 10 ml:aan heksaania ja kromatografoitiin. Kaasukromatografinen analyysi dimetoaatin, pirimikarbin ja malationin yhdistettynä läsnä ollessa suoritettiin käyttämällä Tsvet 55OM -laitetta, joka oli varustettu lämpödetektorilla ja 2 m x 3 mm:n lasikolonnilla, joka oli täytetty 5 % SP 2100:lla Chromosorb W:llä (0,200 - 0,250 mm). Kolonnin lämpötila 220 °C, haihdutin 250 °C, detektori 390 °C. Kantokaasun kulutus (typpi) on 30 ml/min, vety 14 ml/min, ilma 200 ml/min. Dimetoaatin kaasukromatografinen analyysi suoritettiin Tsvet 550M -laitteella, jossa oli lämpödetektori ja 1 m x 3 mm lasikolonni, joka oli täytetty 5 % SE-30:llä Chromaton N Super -laitteessa (0,125 - 0,160 mm). Kolonnin lämpötila 200 °C, haihdutin 240 °C, detektori 320 °C. Kantokaasun kulutus (typpi) on 28 ml/min, vety 14 ml/min, ilma 200 ml/min. Hamilton-mikroruiskua käytettiin näytteiden annosteluun (1 μl). Analysoitujen näytteiden torjunta-ainepitoisuuden kvantitatiivinen arviointi ulkoisella standardimenetelmällä suoritettiin yhtälön mukaisesti (kaikissa tapauksissa analysoidut tilavuudet olivat samat ja olivat 10 ml):

Mahdollisten fosforipitoisten torjunta-aineiden hydrofobisuusparametrien arviointi niiden retentioindeksien perusteella korkean suorituskyvyn käänteisfaasinestekromatografiassa

Orgaanisten yhdisteiden eri ominaisuuksien joukossa 1-oktanoli/vesi -järjestelmän jakautumiskertoimet (log P) ovat erityisen tärkeitä. Tätä orgaanisten yhdisteiden hydrofobisuuden mittaa ehdotettua parametria käytetään useisiin tarkoituksiin. Yksi niistä on ekomyrkyllisten aineiden käyttäytymisen ennustaminen ympäristön esineissä. Kasveissa ja maaperässä tapahtuvaa torjunta-aineiden hajoamista koskevien tunnettujen tietojen huomioon ottaminen osoittaa, että niiden havaitsemisen kesto tällaisissa kohteissa on selvästi ilmaistu riippuvuuden hydrofobisuusparametreista. Esimerkiksi pyretroidien ja organofosforitorjunta-aineiden vertailuominaisuudet (pyretroidien log P-arvot ovat keskimäärin 2-4 yksikköä korkeammat kuin OPP:llä) osoittavat pyretroidien pidempää säilymistä eri viljelykasveissa (1-2 viikkoa pidempään), vaikka arvot ovat huomattavasti alhaisemmat. (useita kertoja) kustannusten hinnat. Jopa yhden yhdisteluokan sisällä on selvästi havaittavissa maaperässä olevien torjunta-aineiden rekisteröinnin keston riippuvuus niiden hydrofobisuudesta.

Esimerkiksi enemmän hydrofobisia OPC:itä (log P 3-4) havaitaan 5-15 päivää pidempään kuin vähemmän hydrofobisia (log P 1). Sen lisäksi, että arvioidaan ja ennakoidaan torjunta-aineiden käyttäytymistä erilaisissa ympäristökohteissa, log P -arvoja voidaan käyttää yhtenä kriteerinä uusien lupaavien kasvinsuojeluaineiden valinnassa. Näin ollen uskotaan, että organofosforiyhdisteiden hyönteismyrkkyaktiivisuus korreloi myös niiden hydrofobisuuden kanssa, ja siten log P -arvot voivat olla hyödyllisiä uusien hyönteismyrkkyjen etsimisessä. Suorittaessaan näytteen valmistelua käyttämällä SPE:tä modifioiduilla silikageeleillä, kuten kirjallisuuskatsauksessa todettiin, useat kirjoittajat yhdistävät torjunta-aineiden uuton tehokkuuden niiden hydrofobisuuteen. Siksi tämä parametri on kiinnostava paitsi ympäristökäyttäytymisen karakterisoinnissa tai uusien lupaavien torjunta-aineiden etsimisessä, myös analyyttisesti. Log P:n kokeelliseen määritykseen 1-oktanoli/vesi-järjestelmässä liittyy merkittäviä vaikeuksia, joista tärkeimpänä tulisi pitää molempien liuottimien hitaasti erottuvien emulsioiden muodostumista keskenään. Tämä johtaa kohtuuttoman pitkään tasapainon saavuttamiseen, jonka puuttuminen ilmenee useiden aineiden log P -arvojen alhaisena laboratorioiden välisenä toistettavuutena (joitakin arvioita käyttämällä torjunta-aineiden esimerkkiä, katso). Tunnetut menetelmät log P:n määrittämiseksi voidaan jakaa kahteen ryhmään - suoriin ja epäsuoriin.

Suorat menetelmät perustuvat aineiden tasapainopitoisuuksien suoraan mittaamiseen molemmissa (tai yhdessä, useimmiten vesipitoisessa) rinnakkaisessa faasissa. Klassinen esimerkki tällaisista menetelmistä on laajalti käytetty "ravistelupullo" -menetelmä, jonka avulla voidaan määrittää log P -arvot välillä -2,5 - +4,5. Kuitenkin useissa tapauksissa sen avulla saatujen tietojen laboratorioiden välinen toistettavuus saavuttaa ± 1,3 log P yksikköä. Muut menetelmät log P:n määrittämiseksi ovat joko aikaa vieviä tai vaativat erikoislaitteiden käyttöä. Vaikeudet mitata suoraan log P -arvoja ovat johtaneet syntymiseen Suuri määrä epäsuorat menetelmät niiden arvioimiseksi. Jotkut niistä perustuvat log P:n laskemiseen additiivisilla kaavioilla (perustuu molekyylifragmenttien log P:n lisäyksiin, mukaan lukien nykyaikaisten ohjelmistojen (ACD tai CS ChemDraw) käyttö), toiset sisältävät muotoa ( 8), jonka kertoimet lasketaan pienimmän neliösumman menetelmällä aiemmin karakterisoitujen aineiden tietosarjoista:

Parametrit A sisältävät molemmat molekyyliominaisuudet - polarisoituvuus (molekyylitaitto), ionisaatiopotentiaali, dipolimomentti ja jotkut fysikaaliskemialliset vakiot - kiehumispiste, vesiliukoisuus (vain homologisissa sarjoissa) sekä kokeellisesti määritetyt retentioparametrit käänteisfaasi-HPLC:ssä ( yleensä käyttämällä pidätyskertoimien logaritmeja tai kapasiteettikertoimia log k1). Huolimatta lukuisista esimerkeistä sorbaattien hydrofobisuuden karakterisoimiseksi log k-arvojen (HPLC) avulla, kromatografisia invariantteja, kuten retentioindeksejä, jotka ovat vähemmän riippuvaisia ​​erotusolosuhteista kuin kapasiteettikertoimista, ei ole tähän mennessä käytetty näihin tarkoituksiin.

Ulkoisten standardien ja standardilisäainemenetelmien vertailu kasvien torjunta-ainepitoisuuden arvioimiseksi

Kasviesineiden torjunta-ainepitoisuuden arvioiminen on ratkaiseva ja viimeinen vaihe ekomyrkyllisten aineiden jäämien määrittämisessä. Kirjallisuuskatsauksessa todettiin, että tähän tarkoitukseen käytetään kahta kvantitatiivisen kromatografisen analyysin menetelmää: suosituin on ulkoinen standardimenetelmä (absoluuttisen kalibrointimenetelmän tyyppi) ja sisäinen standardimenetelmä. Ulkoisen standardimenetelmän laaja käyttö johtuu luultavasti yksinkertaisesta määritysmenettelystä.

Se koostuu standardiliuosten ja kohdenäytteestä saadun näytteen analysoinnista sekä torjunta-aineen pitoisuuden lisämäärityksestä suhteessa: jossa Cx, Cst. - analyytin pitoisuus testi- ja standardiliuoksissa; Mx, Met. - analyytin määrä testi- ja standardiliuoksessa (jos niiden tilavuudet ovat samat); Рх, Рст# - analyytin piikin pinta-ala (korkeus) testi- ja standardiliuoksissa Kvantitatiivisen määrityksen tulosten virheen satunnaiskomponentin arviointi ulkoisella standardimenetelmällä suoritetaan seuraavien suhteiden mukaisesti: missä 5СХ , 5Сст., - virheet torjunta-aineen pitoisuuksien määrittämisessä ja asettamisessa analysoiduissa ja standardiliuoksissa; 5MX, 8MST. virheet torjunta-ainemäärien määrittämisessä ja asettamisessa analysoiduissa ja standardiliuoksissa (jos niiden tilavuudet ovat samat); 8РХ, SPSCT. - virheet torjunta-ainehuippujen pinta-alojen (korkeuksien) määrittämisessä testi- ja standardiliuoksissa. Näytteen kromatografista analyysiä varten valmistuksen eri vaiheissa voidaan kuitenkin havaita merkittäviä torjunta-aineiden häviöitä, mikä johtaa niiden pitoisuuden laskuun lopullisessa testiliuoksessa ja sen seurauksena aliarvioituihin määritystuloksiin. Kirjallisuuskatsauksessa todettiin myös, että sisäisen standardimenetelmän avulla voidaan vähentää systemaattisen virheen vaikutusta lopullisiin analyysituloksiin. Sen etu olisi tässä tapauksessa kiistaton, jos sisäisten standardien valinnassa ei olisi vaikeuksia. Samanaikaisesti tämän tyyppinen sisäinen standardimenetelmä standardilisäainemenetelmänä ei ole vielä löytänyt sovellutustaan ​​kasvien (ja muiden) esineiden torjunta-ainepitoisuuden arvioinnissa. Tämä menetelmä sisältää määritettävän yhdisteen käyttämisen sisäisenä standardina. Sen sisällön määrittämiseksi näytteessä (Cx) on analysoitava kaksi näytettä: ensimmäinen näyte ja näyte sen jälkeen, kun siihen on lisätty tunnettu määrä standardilisäainetta.

Käyttämällä yksinkertaista suhdetta (jos analysoidut tilavuudet ovat yhtä suuret) yhdistämällä kromatografisen signaalin kasvu testiyhdisteen lisäämiseen, määritetään sen alkuperäinen pitoisuus näytteessä: määritetty analyytin määrä alkuperäisessä näytteessä; MDOB. -vertailunäytteen lisääminen; Rx, Rx+Lisää. - analyytin piikkien pinta-ala (korkeus) näytteissä, jotka vastaavat alkuperäistä näytettä ja näytettä, jossa on lisäaine, t - alkuperäisen näytteen massa, V - analysoitavan näytteen tilavuus. Kvantitatiivisten määritysten tulosten (5МХ) satunnaisvirhe standardinmukaisella additiomenetelmällä (8MDB "SP ja SV" 8 MDB.) voidaan arvioida suhteella: missä 8РХ, 8Рх+ДБ - virheet pinta-alojen (korkeuksien) määrittelyssä ) alkuperäisen näytteen ja lisäainetta sisältävän näytteen analyyttien piikeistä. Lausekkeiden (15) ja (16) vertailu osoittaa, että määritysvirheen satunnainen komponentti käyttämällä standardisummausmenetelmää kohdassa Px Px+ext on suurempi kuin käyttämällä ulkoista standardimenetelmää, koska (Px+Add / (Px+add - Px) » 1, mutta kohdassa Px + add » Px ja siten Px + add / (Px + Add - Px) " 1 ne ovat suuruudeltaan vertailukelpoisia. Lisäksi sen lisälähde on kaksinkertainen kokeellisten määrä toiminnot näytteen valmistuksen aikana. Kuitenkin systemaattisen virheen vaikutuksen väheneminen käytettäessä standardilisäysmenetelmää (samoin kuin sisäisen standardin menetelmässä) mahdollistaa pääsääntöisesti pienentää kokonaismääritysvirhettä merkittävästi. kromatografisten määritysten tekeminen ulkoisella standardilla ja standardilisäysmenetelmillä on suunnilleen sama, mutta näytteenvalmistusoperaatioiden määrä standardilisäysmenetelmää käytettäessä kaksinkertaistuu

Kochmola, Nikolai Maksimovich

Kromatografiset menetelmät ovat edelleen tärkein työkalu torjunta-aineiden analyyttisessä kemiassa. Kehitysvauhdilla mitattuna kapillaarikaasukromatografia (GC), korkean erotuskyvyn nestekromatografia (HPLC) ja kaasukromatografia-massaspektrometria (GC/MS, LC/MS) ovat joukossa ensimmäisiä. Kapillaari-GC:llä ei ole vaihtoehtoa kehitettäessä menetelmiä useiden torjunta-ainejäämien määrittämiseen. p> Useita torjunta-aineita, joita käytetään maataloudessa Ukrainaa ei voida kohdistaa suoraan kaasukromatografiseen määritykseen niiden alhaisen haihtuvuuden tai riittämättömän lämpöstabiilisuuden vuoksi. Jotta nämä yhdisteet olisi mahdollista määrittää GC:llä, ne muunnetaan erilaisiksi johdannaisiksi. Tämä toimenpide yleensä lisää haihtuvuutta ja vähentää kromatografoitujen yhdisteiden adsorptiota kiinteille alustoille, lisää niiden lämpöstabiilisuutta ja parantaa erotusta. Joissakin tapauksissa tämä saa aikaan myös merkittävän lisäyksen tuloksena olevien johdannaisten havaitsemisen herkkyydessä. Kaikki tämä on reaktiokaasukromatografian aihe. Olemme ensimmäistä kertaa kotimaisessa tutkimuksessa osoittaneet reaktiivisen kaasukromatografian käytön tehokkuuden torjunta-aineiden analysoinnissa käyttämällä esimerkkiä rikkakasvien torjunta-aineiden jäännösmäärien määrittämisestä - fjohdannaiset (2,4-D, 2,4-DM) elintarvikkeissa. Siitä lähtienmää on käytetty laajalti instituutin laboratorioissa tehtäessä torjunta-aineiden valtiontestejä ja suoritettaessa valtion terveys- ja hygieniatarkastuksia. AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

HPLC-menetelmä on osoittanut tiettyjä etuja torjunta-aineiden ja niiden metaboliittien yhteismäärityksessä yhdestä näytteestä. Tämä pätee erityisesti niihin torjunta-aineisiin, joita ei voida määrittää GC:llä niiden termisen epävakauden, korkean polariteetin ja alhaisen haihtuvuuden vuoksi. HPLC:n käyttö torjunta-aineiden analysoinnissa eliminoi työvoimavaltaisten derivatisointitoimenpiteiden tarpeen. Instituutti oli yksi ensimmäisistä Ukrainassa, joka käytti tätä menetelmää torjunta-aineiden määrittämiseen. Tällä hetkellä HPLC on rutiinianalyysimenetelmä monissa instituutin laboratorioissa. Tätä menetelmää käytetään erityisen laajalti elintarvikkeiden valtion terveys- ja hygieniatarkastuksessa.

Kun luetellaan kromatografisia menetelmiä, joita käytetään torjunta-ainejäämien analysoinnissa, ei voida jättää mainitsematta ohutkerroskromatografiamenetelmää (TLC), jonka ukrainalaiset tutkijat N. A. Izmailov ja M. S. Schreiber löysivät vuonna 1938. TLC:n puolikvantitatiivinen versio on edelleen halpa ja tehokas menetelmä torjunta-ainejäämien erottamiseen, tunnistamiseen ja puolikvantitatiiviseen määritykseen. TLC:n puolikvantitatiivisella versiolla oli suuri rooli Ukrainan terveysministeriön kemiallisen analyyttisen palvelun kehittämisessä, joka valvoo torjunta-ainejäämien sisältöä elintarvikkeissa ja ympäristössä, kun GC- ja HPLC-menetelmiä ei vielä ollut käytössä. saatavilla laajaan käyttöön. Tämä johtui suurelta osin instituutin seinien sisällä tehdystä työstä. Tällä hetkellä TLC:tä torjunta-ainejäämien analysoinnissa käytetään pääasiassa vaihtoehtoisena analyysimenetelmänä GC- ja HPLC-menetelmillä saadun torjunta-aineen tunnistamisen oikeellisuuden varmistamiseksi. TLC on myös välttämätön työkalu torjunta-ainejäämien analysoinnissa, kun on tarpeen testata erittäin suurta määrää elintarvike- tai ympäristönäytteitä torjunta-aineiden esiintymisen varalta. Tällaisissa tapauksissa käytetään yleensä seulontamenetelmää. Kaikki näytteet, jotka antavat "positiivisen" reaktion, tutkitaan edelleen jollain tarkemmalla instrumentaalimenetelmällä (GC, HPLC, GC/MS, LC/MS), kun taas kaikki negatiiviset seulontatulokset hyväksytään lopullisiksi ilman minkäänlaista varmennusta. Instituutilla on joukko laitteita kvantitatiiviseen TLC:hen (KAMAG-yritys, Saksa). TLC:n jatkokäytön torjunta-aineiden analysoinnissa tulisi kuitenkin ensisijaisesti yhdistää tämän menetelmän puolikvantitatiiviseen versioon. Tälle ei ole vaihtoehtoa.

Jokaiselle torjunta-aineiden käytön vaiheelle maailman maatalouskäytännössä viime vuosisadan 40-luvun lopulta nykypäivään voidaan luonnehtia omat kemialliset ja analyyttiset ongelmansa. Yksi haaste torjunta-ainejäämien analysoinnissa on kuitenkin jatkuva – tarve jatkuvasti pienentää torjunta-aineiden kvantifiointirajaa (LOQ). Hyvin alhaisten kvantifiointirajojen saavuttamiseen MVI:tä käytettäessä seuraa analyysituloksen luotettavuustason (tunnistuksen luotettavuuden) lasku. Usein erittäin alhaisten kvantifiointirajojen saavuttamiseksi on tarpeen käyttää monimutkaista monivaiheista puhdistusmenettelyä ja derivatisointivaihetta, jotta voidaan käyttää erittäin selektiivisiä ja erittäin herkkiä ilmaisimia (ECD, TID). Tähän liittyy kuitenkin väistämättä analyytin häviöitä näiden toimenpiteiden aikana, mikä johtaa analyysivirheen lisääntymiseen. Lisäksi analysoitavan matriisin koostumuksen vaihtelu näytteestä toiseen vaikuttaa myös. Tässä suhteessa analyyttinen kemisti ei voi aina tyydyttää hygienistin ja toksikologin toivetta saada MVI, jonka kvantifiointirajat ovat erittäin alhaiset käytettyjen instrumenttien teknisten ominaisuuksien ja kehitetyn MVI:n metodologisten rajoitusten vuoksi. MVI:itä kehitettäessä analyyttisen kemistin ei tulisi keskittyä pelkästään analysoitavien torjunta-aineiden kvantitatiivisten rajojen saavuttamiseen, mutta ei saa unohtaa torjunta-ainejäämien analyysin tärkeämpiä näkökohtia: tunnistamisen luotettavuutta ja tulosten toistettavuutta. Tiedetään, että Ukrainassa tällä hetkellä joissakin maatalouskasveissa ja elintarvikkeissa torjunta-aineiden pitoisuus ei ole sallittua (ns. nollatoleranssit) tai se on havaitsemisrajalla (LOD), eli havaittavissa olevia torjunta-ainejäämiä ei pidetä hyväksyttävinä. Tällaisissa tapauksissa torjunta-aineen tunnistamisen luotettavuus on ensiarvoisen tärkeää sen sijaan, että sen pitoisuus määritetään tarkasti määrällisesti, koska jo torjunta-aineen havaitseminen on perusta maatalouden raaka-aineiden tai elintarvikkeiden käytön kieltämiselle. . Näissä tapauksissa puolikvantitatiivisen TLC:n käyttö on täysin perusteltua, mikäli määritettävä torjunta-aine tunnistetaan luotettavasti.

Ymmärtäen torjunta-ainejäämien analyysissä määritettävien yhdisteiden tunnistamisvarmuuden lisäämiseen liittyvien kysymysten tärkeyden, toteutimme systemaattisia tutkimuksia klooria ja typpeä sisältävien torjunta-aineiden molekyylien välisten vuorovaikutusten selvittämiseksi kaasu- ja nestekromatografiassa. Samalla todettiin ensimmäistä kertaa korrelaatioiden olemassaolo kromatografisilla menetelmillä eri sorptiomekanismeilla saatujen homologisten sorbaattisarjojen jäsenten retentioparametrien välillä. Tällaisten riippuvuuksien käytön tehokkuus torjunta-aineiden tunnistuksen luotettavuuden lisäämiseksi osoitettiin esimerkillä homologisista kloorialkaanikarboksyyli- ja kloorifja niiden esterien, kloorifenolien, substituoitujen fenyyliureoiden, nitrofenolien ja nitrofenolisubstituoitujen bentsotriatsoimiyhdisteiden, happoesterit.

Optimaalisten menetelmien löytäminen torjunta-aineiden analysointiin on yksi analyyttisen kemian tärkeimmistä ongelmista. Nykyaikaisesta näkökulmasta näihin kuuluvat ensisijaisesti kapillaarikaasukromatografia (GC), korkean erotuskyvyn nestekromatografia (HPLC), ohutkerroskromatografia (TLC) ja kapillaarielektroforeesi (CE). Näillä menetelmillä on suuri erotusteho, joka tarvitaan monikomponentinäytteiden analysointiin, ja korkea herkkyys, mikä mahdollistaa torjunta-aineiden määrittämisen 1 μg/dm 3 tai sitä alhaisemmilla pitoisuuksilla.

Tietyn analyysimenetelmän valinta riippuu pitkälti itse analyysitehtävästä. Tyypillisiä tehtäviä ovat seuraavat:

− torjunta-aineiden määrittäminen niiden tuotannon eri vaiheissa, valmiiden muotojen valmistus, varastoinnin aikana;

− torjunta-ainejäämien määrittäminen maataloustuotteissa, maaperässä ja luonnonvesissä;

− torjunta-aineiden määrittäminen biologisista näytteistä;

− torjunta-aineiden määrittäminen elintarvikkeista, ilmakehästä ja juomavedestä.

Kaksi viimeistä tehtävää ovat vaikeimpia, koska niissä ei vaadita samanaikaisesti tunnettujen aineiden määrittämistä, vaan yhdisteiden määrää koko käytännössä käytettävien torjunta-aineiden luettelosta, joiden lukumäärä ylittää 1000 nimeä. Tämän tyyppisiä ongelmia kutsutaan joskus seulontatehtäviksi. Ne ratkaistaan ​​pääasiassa GC:llä massaspektrometrisellä ilmaisulla (GC-MS), jossa torjunta-aineiden tunnistaminen suoritetaan käyttämällä valmiiksi luotua massaspektrikirjastoa.

Kun otetaan huomioon torjunta-aineiden laaja valikoima, niiden määritysmenetelmiä valittaessa on luonnollisesti annettava etusija "universaalisille" menetelmille. "Jokaisella aineella on oma analyysimenetelmänsä" -periaatteella toimiva laboratorio voi taata korkean tuottavuuden vain suhteellisen pienelle määrälle aineita. Torjunta-aineryhmästä toiseen siirtyminen vaatii paljon aikaa instrumenttien uudelleenjärjestelyyn ja kalibrointiin, standardien valmisteluun jne.

Kun tarkastellaan kemiallisia analyyttisiä menetelmiä niiden "yleisyyden" kannalta torjunta-aineiden analyysin suhteen, voidaan tehdä seuraavat huomautukset.

TLC-menetelmä on melko herkkä ja helppo suorittaa, mutta suhteellisen alhaisen resoluutionsa vuoksi se ei voi olla "yleinen".

GC-menetelmällä on erittäin korkea resoluutio, mutta sen käyttöä rajoittaa useiden torjunta-aineiden lämpölabibiliteetti ja tarve eri tavoilla monien torjunta-aineiden kemiallinen derivatisointi niiden haihtuvuuden lisäämiseksi.

Kapillaarielektroforeesimenetelmä, jolla on korkea resoluutio, ei anna hyväksyttävää pitoisuusherkkyyttä ja vaatii erittäin korkean näytteen konsentraatioasteen, jota ei usein voida saavuttaa torjunta-aineiden rajallisen liukoisuuden vuoksi.

HPLC-menetelmä tarjoaa riittävän resoluution monien ongelmien ratkaisemiseen, ei pääsääntöisesti vaadi alustavaa derivatisointia ja soveltuu lämpölabiilien torjunta-aineiden analysointiin. Yhdessä GC:n kanssa sen avulla voit ratkaista melkein kaikki ongelmat, ja juuri nämä kaksi menetelmää ovat yleisimpiä nykyaikaisessa ympäristöanalyyttisessa kemiassa.

Torjunta-aineet, kuten jo mainittiin, luokitellaan ensisijaisiksi ekomyrkyllisiksi aineiksi, ja siksi niitä on valvottava jatkuvasti ympäristön kohteissa. Torjunta-aineiden seurantaan kuuluu niiden määrällinen määrittäminen useilla eri pitoisuuksilla, mukaan lukien taustatasot. Torjunta-aineiden määritykseen soveltuviin analyyttisiin menetelmiin kuuluvat ensisijaisesti kaasu- ja nestekromatografian korkean suorituskyvyn muunnelmat.

Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) on yksi informatiivisimmista analyysimenetelmistä. Sitä käytetään laajasti kaikissa kehittyneissä maissa, mutta verrattuna muihin fysikaalisiin ja kemiallisiin analyysimenetelmiin se vaatii erittäin korkeasti koulutettua henkilöstöä ja yhden analyysin hinta on useita kymmeniä ja jopa satoja Yhdysvaltain dollareita. Siten itse HPLC-analyysimenettelyn yksinkertaistaminen ja sen kustannusten alentaminen on tärkeä tehtävä.

Nämä HPLC:n haitat johtuvat siitä, että jokaiselle torjunta-aineelle (tai torjunta-aineryhmälle) säädösasiakirjat säätelevät omaa "ainutlaatuista" HPLC-analyysiversiotaan. Tämä johtaa siihen, että kromatografia on rakennettava uudelleen usein, mikä vie paljon aikaa ja vaatii jonkin verran kokemusta. Lisäksi analyyttinen laboratorio, joka tekee analyyseja monilla eri menetelmillä, joutuu ylläpitämään kokonaista varastoa kalliita kolonneja, orgaanisia liuottimia ja standardinäytteitä torjunta-aineista.

Maailmankäytännössä HPLC:llä määritettyjä torjunta-aineita ovat vähän haihtuvat ja lämpölabiilit yhdisteet. Näitä ovat atratsiini, simatsiini, klooriprofaami, linuroni, klooritoluroni, alakloori, trifluoaliini.

Torjunta-aineiden analysoinnissa käytetään erityisiä näytteenkäsittelymenetelmiä, joita on hyödyllistä tarkastella tarkemmin.

Neste-neste-uutto (LLE) on klassinen menetelmä torjunta-aineiden uuttamiseksi vesinäytteistä. Tyypillisesti uuttaminen suoritetaan useita kertoja 500–1000 ml:sta vesipitoista näytettä erotussuppilossa. Suosituin liuotin on dikloorimetaani. Se pystyy uuttamaan yhdisteitä, joilla on eri polariteetti, ja se haihtuu helposti. Yhdysvaltain ympäristönsuojeluviraston (EPA) menetelmissä 8120 ja 8140 käytetään LLE:tä dikloorimetaanin kanssa 15 organokloori- ja 21 organofosforitorjunta-aineen määrittämiseksi vedestä. Rikkakasvien torjunta-aineiden - karboksyylihappojen johdannaisten - uuttamiseksi lähdevesi tehdään happamaksi pH-arvoon<2 и затем экстрагируют неионизованные молекулы диэтиловым эфиром или дихлорметаном.

Classic LLE on vaikea automatisoida, vaatii suuria määriä myrkyllisiä liuottimia ja on erittäin aikaa vievä. Liuotinkerrosten erottamista voimakkaasti saastuneiden vesien analysoinnissa vaikeuttaa usein stabiilien emulsioiden muodostuminen. Tällaisissa tapauksissa suositellaan yksittäistä pitkäaikaista LLE:tä käyttämällä 1 litran erotussuppiloa, jossa on vettä raskaampaa liuotinta.

Vaikka klassisella LLE:llä on monia haittoja, sitä parannetaan edelleen. Näin syntyi mikro-LLE, joka on kehitetty vaihtoehtoiseksi menetelmäksi rikkakasvien torjunta-aineen alakloorin ja sen kahden metaboliitin määrittämiseen. MicroLLE:n periaatetta - uuttaminen suuresta vesimäärästä (400 ml) erittäin pienellä tilavuudella liuotinta (500 μl tolueenia) - voidaan käyttää näytteen valmisteluna GC-analyysiin ilman haihdutusvaihetta, mikä on tärkeää määrityksen kannalta. erittäin haihtuvista yhdisteistä. Kiinteäfaasiuuttoon verrattuna tämä näytteenvalmistusmenetelmä on nopeampi ja halvempi.

Suuri joukko erilaisia ​​rikkakasvien torjunta-aineita (fenyyliureat, triatsiinit, dinitroaniliinit, klooriasetamidit ja urasiilit) uutetaan elintarvikkeista mekaanisesti ravistamalla tai homogenisoimalla orgaanisilla liuottimilla, kuten metanolilla, asetonitriilillä, usein dikloorimetaanilla tai etyyliasetaatilla sekoitettuna veteen, joskus happamassa pH:ssa.

Erittäin polaariset rikkakasvien torjunta-aineet, kuten glyfosaatti, eivät liukene useimpiin orgaanisiin liuottimiin, ja ne uutetaan vedellä tai vedellä ja kloroformilla, joskus happamassa pH:ssa. Tässä menetelmässä uutetaan myös muut vesiliukoiset komponentit (aminohapot, aminosokerit jne.). Niiden läsnäolo häiritsee glyfosaattien määritystä ja tekee tarpeelliseksi puhdistaa uutteet, mikä useimmiten suoritetaan ioninvaihtokromatografiapylväillä.

Bipyridiinitorjunta-aineet (dikvaatti ja parakvatti - kvaternaariset ammoniumyhdisteet) uutetaan tavallisesti matriiseista refluksoimalla tai kuumentamalla rikki- tai kloorivetyhapolla, minkä jälkeen suoritetaan kiinteän faasin uutto ja kromatografia.

Kiinteän faasin uutto (SPE) on tunnettu näytteenvalmistusmenetelmänä 50 vuoden ajan. Sen edut: ajan ja liuottimien säästö, emulsion muodostumisvaaran eliminointi, kyky eristää pieniä määriä analyytiä ja automatisointimahdollisuus. SPE:tä käytetään erityisen usein luonnonvesien analysoinnissa.

SPE:tä käytetään aktiivisesti triatsiinitorjunta-aineiden ja niiden hajoamistuotteiden – hydroksi- s-triatsiinit, rikkakasvien torjunta-aineet - ureajohdannaiset, N-metyylikarbamaatit ja niiden polaariset metaboliitit, organokloori- ja organofosforihyönteismyrkyt, polaariset torjunta-aineet pyretroidit, triatsoli- ja pyrimidiinitorjunta-aineet. Monikomponenttisten seosten SPE-menetelmiä on kehitetty, mukaan lukien suuri määrä eri luokkien torjunta-aineita. Polaaristen torjunta-aineiden uuttotehokkuuden lisäämiseksi käytetään joskus kolonneja, joissa on kahden sorbentin, esimerkiksi C18- ja fenyylifaasin, seosta.

Suorittaessa happojen SPE:tä C18-faasisissa häviöiden vähentämiseksi on suositeltavaa hapottaa näyteliuos pH-arvoon<2. Для ТФЭ неионных соединений иногда применяют графитированные сорбенты и фазы, представляющие собой макросетчатые стирол-дивинилбензольные полимеры. Для пестицидов триазиновой группы, производных мочевины и группы феноксикислот успешно используют картриджи с активированной графитированной сажей Carbopack B, ioninvaihtohartsit asetaattimuodossa ja propyyli-NH2-faasi. Organofosforitorjunta-aineiden SPE:lle, polystyreeni-divinyylibentseenityyppiset kalvolevyt XAD ».

Ylikriittinen nesteuutto (SCLE) on suhteellisen uusi menetelmä, jota käytetään aineiden uuttamiseen käyttämällä erityisiä uuttoaineita - "ylikriittisiä" nesteitä. Tällaiset uuttoaineet voivat olla nestemäistä CO 2 , NH 3 , propaania, butaania jne. Luettelossa olevat kaasut muuttuvat nestemäisiksi korkeissa paineissa, joten SCEZ suoritetaan autoklaaveissa. Uuton päätyttyä autoklaavien paine laskee ilmakehän paineeseen, uuttokaasu lentää pois ja vain uutetut aineet jäävät autoklaaviin. Ne liuotetaan sopiviin liuottimiin ja liuokset analysoidaan.

SLE:tä käytetään ensisijaisesti erilaisten torjunta-aineluokkien analysointiin maaperässä, eläin- ja kasvikudoksissa. Uuttotehoa säädetään lisäämällä uuttoaineeseen muita liuottimia. Yleisin hiilidioksidiin lisättävä liuotin on metanoli. Sen lisääminen mahdollistaa matriisivaikutusten voittamiseksi, kun matriisiin tiukasti sitoutuneita torjunta-aineita ei uuteta puhtaalla hiilidioksidilla. Lisäksi metanolin tai asetonin lisääminen lisää polaaristen yhdisteiden liukoisuutta hiilidioksidiin.

Suoraa SCLE:tä käytetään harvoin analyyttien uuttamiseen vesipitoisesta matriisista. Menetelmän rajoitus liittyy jään muodostumisongelmaan ja vedenpoistoongelmiin

Näytteen valmistelun jälkeen torjunta-aineiden kvantitatiivinen määritys suoritetaan HPLC:llä ja usein UV-detektorilla.

« Elintarvikkeiden torjunta-aineiden jäännöspitoisuuksien ohutkerroskromatografia"

JOHDANTO

Luku 1. Tasomaisen (ohutkerros)kromatografian perusteet

Luku 2. Tekniikan taso ja nykyaikaisten instrumentaalisten menetelmien käyttönäkymät torjunta-aineiden analysoinnissa

Luku 3. Ohjeet klooriorgaanisten torjunta-aineiden määrittämiseksi vedestä, elintarvikkeista, rehuista ja tupakkatuotteista ohutkerroskromatografialla

Luku 4. Nykyaikainen laitteistosuunnittelu

Kirjallisuus

JOHDANTO

Kemikaaleja (hyönteismyrkkyjä, rikkakasvien torjunta-aineita, sienitautien torjunta-aineita) käytetään maaperän lannoittamiseen, rikkakasvien, hyönteisten ja jyrsijöiden torjuntaan sekä viljelykasvien suojaamiseen homeelta ja sieniltä. Niiden avulla ne lisäävät tuottavuutta, pidentävät kasvien säilyvyyttä ja parantavat hedelmien, vihannesten ja jyvien ulkonäköä. Nykyään valikoimassa on 5 000 torjunta-ainetta ja 700 kemiallista ainesosaa. Verrattuna 40-luvun alkuun, jolloin torjunta-aineita käytettiin ensimmäisen kerran, niiden kulutus maataloudessa on kymmenkertaistunut ja satohävikki on lisääntynyt. hyönteisten määrä on kaksinkertaistunut viimeisen 50 vuoden aikana. Nämä tilastot kyseenalaistavat torjunta-aineiden "tehokkuuden". Mielenkiintoista on, että torjunta-aineiden käyttö on johtanut 650 tuholaislajin kehittymiseen, jotka ovat vastustuskykyisiä joillekin näistä myrkkyistä.
Joka päivä noin 3 000 ihmistä ympäri maailmaa myrkytetään torjunta-aineilla. Tämä on yli miljoona myrkytystä vuodessa kemikaaleista, jotka saastuttavat ilmaa, maaperää, vettä ja ruokaa. Euroopan osalta nämä luvut eivät ole yhtä järkyttäviä. Vasta vuonna 2005 EU-maat alkoivat yrittää ottaa käyttöön yhteisiä standardeja elintarvikkeiden kemikaalien vaarojen arvioinnissa ja yhtenäisiä elintarvikkeiden merkintöjä. Tiedetään, että monet torjunta-aineet ovat terveydelle haitallisia ja niillä on syöpää aiheuttavia ominaisuuksia, mutta toistaiseksi ostaja ei voi päätellä etiketistä, kuinka kyllästynyt ostettu tuote on näillä epäterveellisillä aineilla. Kehittyneissä maissa kuluttajalla on periaatteessa mahdollisuus valita - ostaako "luomu" (ilman kemikaaleja kasvatettuja) tuotteita tai perinteisiä tuotteita. Hintaero on melko merkittävä, eikä "luomu" -tuotteiden valikoima ole yhtä laaja kuin perinteisten.

Ympäristönsuojelujärjestö myöntää, että 320 maataloudessa käytettäväksi hyväksytystä torjunta-aineesta vähintään 66 on
epäiltyjä karsinogeeneja. Monet näistä torjunta-aineista on sekoitettu 1 200 neutraaliin ainesosaan, joiden koostumusta valmistajien ei vaadita paljastamaan "liikesalaisuuksiin" vedoten. Heistä 800:lle ei ole vielä vahvistettu myrkyllisyyttä, ja niiden epäillään aiheuttavan syöpää , joten se on välttämätöntä käyttää menetelmiä torjunta-aineiden tunnistamiseen elintarvikkeissa.

LUKU 1. TASOKROMATOGRAFIAN PERUSTEET

Tasomainen (ohutkerros)kromatografia

Ohutkerroskromatografialla (tasokromatografialla) on yksi johtavista paikoista monimutkaisten luonnon-, farmaseuttisten, biolääketieteellisten ja kemiallisten kohteiden kvalitatiivisessa ja puolikvantitatiivisessa analysoinnissa. Muiden kromatografisten menetelmien joukossa tasomakromatografialla on seuraavat edut ja ominaisuudet:

Tämä on ainoa kromatografinen menetelmä, joka mahdollistaa tuntemattoman seoksen täydellisen analyysin, koska tutkijalla on mahdollisuus tarkistaa, onko alussa jäljellä eluoimattomia komponentteja;

Ylittää kaasun ja

korkean erotuskyvyn nestekromatografia vähintään suuruusluokkaa; käyttää yksinkertaisempia ja halvempia laitteita;

Sillä on korkea selektiivisyys, jota voidaan helposti vaihdella valitsemalla liikkuvan faasin koostumus; toisin kuin HPLC:ssä, liuottimien valinnassa ei ole rajoituksia;

Mahdollistaa useiden näytteiden samanaikaisen erottamisen; yhden tai usean eluoinnin käyttö (eri olosuhteissa) sekä saman näytteen komponenttien samanaikainen erottaminen eri eluentteja käyttäen;

Resoluutio optimointi mahdollista

kromatografinen järjestelmä monimutkaisen seoksen erottamiseksi vain kiinnostuksen kohteena oleville komponenteille, mikä säästää aikaa;

On mahdollista havaita yhdisteitä, joissa on korkea

herkkyys ja selektiivisyys, joita voidaan helposti vaihdella valitsemalla kehitysreagenssi; saadut erotustulokset on helppo arvioida visuaalisesti;

voit tallentaa kromatogrammit myöhempää käyttöä varten

havaita ja suorittaa spektritunnistus

kromatografiset vyöhykkeet erotuksen jälkeen millä tahansa aallonpituusalueella, mukaan lukien IR.

Tasokromatografialla on myös joitain haittoja:

Rajoitettu erotuskyky johtuen erotusvyöhykkeen suhteellisen lyhyestä pituudesta (3-10 cm);

Herkkyys on pienempi kuin HPLC:llä;

Analyysitulosten riippuvuus ympäristöstä: suhteellinen kosteus, lämpötila ja epäpuhtauksien esiintyminen ilmassa;

Vaikeuksia työskennellä erittäin haihtuvien näytteiden sekä ilman tai valon hapen vaikutukselle herkkien aineiden kanssa.

Klassinen, yksinkertaisin ja laajalti käytetty sisältää seuraavat perustoiminnot:

levitetään analysoitu näyte sorbenttikerrokseen;

näytekomponenttien erottaminen erillisiksi vyöhykkeiksi liikkuvan faasin virtauksessa;

3) vyöhykkeiden havaitseminen sorbenttikerroksessa (usein reagenssilla, joka muodostaa värillisiä yhdisteitä erotettujen aineiden kanssa);

4) tuloksena olevan erotuksen kvantitatiivinen arviointi, mukaan lukien retentioarvon ja ainepitoisuuden määrittäminen kromatogrammin vyöhykkeillä.

Ainevyöhykkeen sijaintia kromatogrammissa luonnehtii arvo Rf, joka on yhtä suuri kuin etäisyys lähtöviivasta ainevyöhykkeen keskustaan ​​etäisyyteen lähtöviivasta etulinjaan. Rf-arvo on tietyn yhdisteen vakioarvo tässä järjestelmässä ja riippuu useista olosuhteista: eluointimenetelmästä, sorbentin laadusta ja aktiivisuudesta, kerroksen paksuudesta, liuottimien laadusta, liuottimien määrästä. levitetty aine, liuottimien ajopituus, lähtöviivan sijainti ja se on lähes riippumaton lämpötilasta. Tätä arvoa käytetään seoksen komponenttien tunnistamiseen.

Seoksen komponenttien erotuksen laatuun tasokromatografiassa vaikuttavat monet tekijät: erotuskammion tyyppi; kammion ja sorbenttikerroksen alustava kyllästäminen liikkuvan faasin höyryillä; aloituspisteen koko; etäisyys alustasta levyn alareunaan; laboratoriohuoneen suhteellinen ilmankosteus; hiukkasten keskimääräinen halkaisija ja muoto; sorbenttikerroksen levityksen paksuus ja tasaisuus; mikrovaurion esiintyminen kerroksessa; sorbenttia sitovan aineen tyyppi; eluointinopeus; liuottimen tilavuus kammiossa; epäpuhtauksien läsnäolo eluentissa; konvektio kaasufaasissa kammion sisällä.

Ainesoseosten erottamiseen ohuessa sorbenttikerroksessa käytetään adsorptio-, partitio- ja ioninvaihtokromatografiaa, jotka eroavat ensisijaisesti liuenneiden aineiden ja niiden kanssa kosketuksissa olevien kiinteiden tai nestemäisten faasien välisten vuorovaikutusten luonteesta. Käytännössä näitä vuorovaikutuksia ei juuri koskaan tapahdu erikseen, ja aineiden erottuminen johtuu useista vuorovaikutuksista. Sopivaa kromatografiavaihtoehtoa valittaessa tulee ensin kiinnittää huomiota erotettavien aineiden rakenteeseen. Adsorptio- ja partitiokromatografialla erotetaan aineet, joiden rakenne eroaa polaaristen ja ei-polaaristen substituenttien luonteen, lukumäärän ja luonteen suhteen. Kun kromatografia suoritetaan ohuella sorbenttikerroksella, käytetään useimmiten adsorptiokromatografiaa, joka on yksinkertaisempi suorittaa, tehokkaampi ja analyysitulokset ovat paremmin toistettavissa.

Sorbentit ohutkerroskromatografiassa

TLC:ssä sorbenteina käytetään materiaaleja, jotka täyttävät seuraavat vaatimukset: muodostavat kemiallisesti ja fysikaalisesti stabiileja kerroksia; eivät muodosta kovalenttisia sidoksia erotettavien aineiden kanssa; älä liukene liikkuvaan faasiin tai liiku sen mukana levyä pitkin; eivät sisällä komponentteja, jotka häiritsevät erottamista tai havaitsemista; niillä ei ole omaa väriä; eivät turpoa tai kutistu liikkuvan vaiheen vaikutuksesta.

Sorbentin substraattina käytetään lasia, alumiinifoliota ja polymeerikalvoja (polyeteenitereftalaattia). Substraatin sorbenttikerroksen stabiiliuden lisäämiseksi käytetään erilaisia ​​sideaineita: kipsiä (5-10 %), silikasoolia, alkalimetallisilikaatteja, polyakryyliamidia, polyakryylieetteriä, tärkkelystä. Adsorbenttiin lisätään usein fluoresoiva indikaattori aineiden havaitsemiseksi, jotka absorboituvat spektrin UV-alueella. Käytä tähän tarkoitukseen: sinkin ja magnesiumsilikaattien seosta; sinkin ja kadmiumsulfidien seos; maa-alkalielementtien volframatit.

Erityisesti erotustehokkuuden kannalta erittäin tärkeitä ovat sorbentin ominaisuudet, kuten hiukkasten halkaisija, keskimääräinen hiukkaskokojakauma ja huokoskoko. Klassisessa ohutkerroskromatografiassa levyjen valmistukseen käytetään hiukkasia, joiden koko on 5-20 mikronia. Korkean suorituskyvyn ohutkerroskromatografia (HPTLC) vaatii sorbentin, jonka hiukkashalkaisija on 5 - 7 mikronia. Levyjen ominaisuuksien vertailu TLC:tä ja HPTLC:tä varten on annettu taulukossa 22. Monoliittiset sorbentit edustavat uuden sukupolven stationäärisiä faaseja, joita voidaan käyttää ja saada tasokromatografiassa metakryylipolymeerien suoralla kopolymeroinnilla, esimerkiksi glysiinimetakrylaatin ja eteenidimetakrylaatin kopolymeerillä. Monoliittiset kiinteät faasit eivät sisällä hiukkasia, ja erotustilan roolissa on virtauskanavien (huokosten) pinta ja tilavuus. Monoliittisten sorbenttien makrohuokoinen rakenne sisältää vähintään kahdentyyppisiä huokosia: makro- ja mesohuokosia. Tällaisten kantajien etuja ovat erotuksen nopeuden ja tehokkuuden huomattava lisäys, koska niillä ei ole tavanomaisia ​​rajapintamassansiirron diffuusiorajoituksia.

Taulukko 1. Klassisen (TLC) ja korkean suorituskyvyn (HPTLC) ohutkerroskromatografian levyominaisuuksien vertailu.

TLC:ssä käytetyt sorbenttityypit

Silikageeli

polaarinen adsorbentti, sisältää aktiivisia silanoli- ja siloksaaniryhmiä, sitä käytetään eri polaaristen yhdisteiden erottamiseen.

Alumiinioksidi

polaarinen adsorbentti, jolla on heterogeeninen pinta, sisältää aktiivisia OH-ryhmiä ja sillä on huomattavasti korostuneet protoni-akseptoriominaisuudet; sitä käytetään aromaattisten hiilivetyjen, alkaloidien, kloorattujen hiilivetyjen, steroidien erottamiseen

Florosil on tärkein magnesiumsilikaatti, sillä se on alumiinioksidin ja silikageelin välissä; sopii flavonoidien, steroidien ja asetyloitujen hiilivetyjen erottamiseen

Polyamidit ovat ryhmä polaarisia sorbentteja, joihin on sekoitettu

erotusmekanismi: karboksamidiryhmä vastaa adsorptiomekanismista, metyleeniyksiköt jakelumekanismista. Näitä sorbentteja käytetään elintarvikevärien, flavonoidien, tanniinien, nitrofenolien, alkoholien ja happojen erottamiseen.

Modifioidut silikageelit, joissa on oksastettuja ryhmiä (amino, syano, dioli-, C 2 -, C g -, C 1 g -), eri polaarisuus.

Sorbentin tärkeä ominaisuus on sen aktiivisuus, se riippuu vesipitoisuudesta ja vähenee sorbentin vesipitoisuuden kasvaessa.

Aineseosten onnistuneen erottamisen kannalta sorbentin valinta on erittäin tärkeä. Ensinnäkin on lähdettävä erotettavien yhdisteiden ominaisuuksista: niiden liukoisuudesta (hydrofiilisyys, hydrofobisuus), funktionaalisten ryhmien sisällöstä ja luonteesta. Tyydyttyneet hiilivedyt adsorboituvat heikosti tai eivät adsorboidu lainkaan silikageeleihin ja alumiinioksidiin. Kaksoissidosten, erityisesti konjugoitujen, OTTO lisää yhdisteiden adsorptiokykyä.

Funktionaaliset ryhmät parantavat edelleen aineiden adsorboitumiskykyä. Funktionaalisten ryhmien adsorptiokyky kasvaa seuraavassa järjestyksessä:

CH=CH<ОСНз<СООR

Aineen pitoisuuden kvantifiointiin kromatografisilla vyöhykkeillä käytetään erilaisia ​​menetelmiä:

1. Määritys poistamalla kromatografinen vyöhyke levyltä voidaan suorittaa kahdella tavalla: siirtämällä kromatografinen vyöhyke sorbentin mukana tai uuttamalla kromatografinen vyöhyke sorbenttikerroksesta.

2. Yhdisteiden määritys suoraan levyltä vertaamalla visuaalisesti täpläalueiden kokoa ja niiden väriä standardinäytteiden täplien vastaaviin parametreihin

3. Densitometriamenetelmä, joka lisää määritystulosten tarkkuutta, perustuu kromatogrammien pyyhkäisyyn näkyvässä ja UV-valossa käyttämällä ”kromatografisia spektrofotometriä” densitometrejä. Densitometreillä voit mitata aineen valon absorptiota kromatogrammissa lähetys- tai heijastustilassa sekä fluoresenssia ja sen vaimenemista. Lähetystila on käytettävissä vain, jos tutkittavalla aineella on absorptiokaista spektrin näkyvällä alueella. UV-alueella rekisteröintiä transmissiotilassa ei voida suorittaa silikageelin ja kromatogrammin substraatin luontaisen absorption vuoksi.

4. Videodensitometrimenetelmä on suhteellisen uusi menetelmä kromatogrammien kvantitatiiviseen käsittelyyn. Menetelmän periaatteena on syöttää kromatogrammikuva tietokoneelle videokameralla tai digitaalikameralla, minkä jälkeen verrataan standardiyhdisteiden ja määritettyjen yhdisteiden täplien intensiteettejä. Videodensitometriin kuuluu valaistusyksikkö, videokamera videokaappauskortilla tai skannerilla sekä henkilökohtainen tietokone, johon on asennettu Windows-käyttöjärjestelmä ja vastaava ohjelmisto. Venäjällä tällaisia ​​komplekseja tuottaa tieteellinen ja tekninen keskus "Lenchrome" (Pietari) - densitometri "DenScan-O4" ja "Sorbpolymer" (Krasnodar) densitometri "Sorbfil". Kromatografisen tietojenkäsittelyohjelman avulla voit suorittaa seuraavat toiminnot: syöttää kromatogrammia ja tallentaa ne korkealaatuisina ja tarkkoina; valitse syöttökromatogrammin kuvasta työalue, jossa suoritetaan lisäkuvankäsittelyä; tuottaa

automaattinen tai manuaalinen pistehaku; käsittele täplät, muunna ne kromatografisten piikkien muotoon, laske R r-arvot ja piikkien pinta-alat; mitata ainepitoisuus analysoiduissa pisteissä (suhteellisissa yksiköissä); syötä pitoisuusarvot kalibrointiriippuvuuksien muodostamiseksi: lineaarisella interpoloinnilla; lineaarinen approksimaatio useamman kuin kahden pisteen kautta; neliöllinen interpolointi; laskee automaattisesti ainepitoisuuden analysoiduissa pisteissä syötettyjen kalibrointiarvojen perusteella; esittää tuloksia tulostettujen asiakirjojen muodossa. 1-3

Pisteen kvantitatiivinen käsittely videodensitometriassa suoritetaan kahdella ominaisuudella: pisteen pinta-ala ja sen "tilavuus" avaruudessa, kun taas kirkkautta (pisteen värin intensiteettiä) käytetään kolmantena koordinaattina (kuva 1). ).

Riisi. 1. Kirkkauden spatiaalisen jakautumisen tyyppi pistealueella:

Ai,j - pistepisteen kirkkaustason arvo; Bi,j on pohjapinnan pisteen kirkkaustason arvo.

5. Densitometria tasoskannerilla, jossa on kromatogrammien käsittelyohjelmisto, joka ei käytännössä eroa videodensitometreihin käytetyistä standardiohjelmista, mutta huomattavasti halvemmalla. Tässä tapauksessa skannaus antaa selkeämmän kuvan kromatografisista vyöhykkeistä, mikä voidaan selittää analysoitavien kohteiden epätasaisen valaistuksen vähentyneellä vaikutuksella kuin videodensitometrillä.

Sovellus käytännön ongelmien ratkaisemiseen. Niiden käyttö on erityisen tehokasta veden, maaperän ja ilman orgaanisten epäpuhtauksien monimutkaisten seosten komponenttien alustavaan erottamiseen (luokkien, ryhmien, ainetyyppien mukaan). Yksilöllinen tunnistaminen yksinään käyttämällä on vaikeaa erittäin herkkien ja selektiivisten ilmaisimien puutteen vuoksi, lisäksi kohdekomponenttien määritys on vähemmän tarkkaa kuin GC:n ja HPLC:n tapauksessa. TLC:tä käytetään usein analyysin ensimmäisessä vaiheessa monimutkaisten ja monikomponenttisten orgaanisten yhdisteiden seosten erottamiseen erillisiksi yksinkertaisemmiksi ryhmiksi, ja vasta sitten näiden ryhmien tarkempi tutkimus tehdään "hienemmillä" menetelmillä (GC, HPLC, NMR, IR tai massaspektrometria).

TLC:n käyttö saastuneen makean ja meriveden analysoinnissa avaa laajat mahdollisuudet preparatiiviseen erotukseen, edeltäen muita menetelmiä, haluttujen epäpuhtauksien erottamiseen ja lisätunnistukseen. TLC:tä käytetään havaitsemaan ja

erilaisten aineiden puolikvantitatiivinen määritys: pinta-aktiiviset aineet, hiilivedyt, PAH:t, fenolit, torjunta-aineet.

Ionittomien pinta-aktiivisten aineiden määrittämiseksi jäte- ja jokivesistä käytetään levyjä, joissa on kerros silikageeliä tai Kieselgel o:ta. Pinta-aktiivisen aineen kloroformiuute levitetään levylle ja ne erotetaan käyttämällä liikkuvana faasina etyyliasetaatin:veden:etikkahapon seoksia. Täplät havaitaan, kun niitä ruiskutetaan seoksella, jossa on: Burgerin reagenssi: fosforihappo: etanoli 5 % BaCl 2 .2H 2 0 -liuos (10:1:10:5). Pinta-aktiiviset aineet näkyvät vaaleanpunaisina täplinä. Menetelmällä voidaan määrittää 0,1 - 1,0 mg/l ionittomia pinta-aktiivisia aineita vedessä. Ioniset pinta-aktiiviset aineet uutetaan jätevedestä näissä olosuhteissa, mutta ne liikkuvat liuotinrintaman mukana eivätkä näy.

Fenolien määrittämiseen on ehdotettu monia menetelmiä. Kloorifenolit erotetaan alumiinioksidilevyillä toistuvasti bentseenillä eluoimalla tai silikageelilevyillä eluoiden bentseenin ja petrolieetterin seoksella (1:1). Fenolit määritetään kehittämällä 4-aminoantipyriinin 2-prosenttisella liuoksella (toteamisraja 0,5 μg/l) tai fluoresenssilla 254 nm:ssä (enintään 0,5 μg fenoleja). Toinen vaihtoehto fenolien määrittämiseen on erotus muodossa: antipyriini, 4-aminoantipyriinijohdannaiset tai p-nitrofenyyliatsoväreillä.4-6

Torjunta-aineiden käytön laajeneminen maatalouskäytännössä edistää edelleen analyyttisten kemiallisten menetelmien kehittämistä ja käyttöä pienille pitoisuuksille myrkyllisiä orgaanisia aineita varten ympäristökohteiden, maatalouden raaka-aineiden, rehujen ja elintarvikkeiden analysointiin. Torjunta-ainejäämien määrittäminen näissä ympäristöissä ei ole itsenäistä merkitystä, mutta se on välttämätön osa yleistä tietoa, jotta torjunta-aineiden käyttöön liittyvä riski voidaan arvioida asianmukaisesti. Riskinarvioinnissa on aiemmin ollut kysymys ensisijaisesti ihmisten turvallisuudesta, ja tästä syystä torjunta-ainejäämien määritys on keskittynyt ensisijaisesti maatalouden raaka-aineisiin ja elintarvikkeisiin. Viime vuosina lisääntyvä huomio torjunta-aineiden vaikutuksiin paitsi ihmisiin myös heidän ympäristöönsä edellyttää merkittävästi enemmän tietoa käytettävien torjunta-aineiden jäämistä, mutta myös niiden tuhoutumis- ja aineenvaihduntatuotteista eri ympäristöissä. Torjunta-ainejäämien tutkimus kattaa nyt kaikenlaiset maatalouden raaka-aineet, rehut ja elintarvikkeet, veden, ilman ja maaperän. Tämä yhdistettynä vähäkulutuksisten torjunta-aineiden käyttöönottoon maataloustekniikoissa (<10 г/га) требует принципиально новых подходов и методов для идентификации и количественного определения остатков пестицидов в различных средах.

Ottaen huomioon tarvittavan tiedon määrä, joka on hankittava eri matriisien ja väliaineiden analysoinnista, torjunta-ainejäämien mittausmenettelyn (MPR) on täytettävä useimmat tai kaikki seuraavista vaatimuksista:

Varmista, että analysoitava aine erotetaan luotettavasti häiritsevistä epäpuhtauksista;

Varmista analyytin yksiselitteinen tunnistaminen;

on alhainen määräraja;

Varaa lyhyt analyysiaika;

on alhaiset kustannukset;

Varmista tulosten kohtuullinen tarkkuus ja oikeellisuus;

Varmista saatujen tulosten luotettavuus.

Menetelmien kehittäjien halu täyttää nämä vaatimukset mahdollisimman täydellisesti on yksi tärkeimmistä MVI:n parantamisen kannustimista. Nykyaikainen MVI, joka perustuu instrumentaalisiin analyysimenetelmiin, on jaettu seuraaviin vaiheisiin:

Analysoitujen torjunta-aineiden ja niiden aineenvaihduntatuotteiden uuttaminen;

Saadun uutteen puhdistus;

Analysoitujen torjunta-aineiden johdannaisten ja niiden tuhoutumis- ja aineenvaihduntatuotteiden mahdollinen tuotanto;

Kromatografinen erotus

Analysoitujen aineiden määrittäminen (ilmaisu).

MVI:ssä käytetyn uuttomenetelmän tulee varmistaa analyyttien kvantitatiivinen ja selektiivinen uutto, eli analyyttien maksimaalinen uutto analysoidusta matriisista taustalla, että koekstraktiivisten (häiritsevien) aineiden uuttaminen on mahdollisimman vähäistä. Muussa tapauksessa vaaditaan monimutkaisempi tuloksena olevan uutteen puhdistusvaihe, mikä johtaa väistämättä analyyttien hävikkiin ja kokonaisanalyysivirheen lisääntymiseen. Siksi torjunta-ainejäämien analysoinnissa nykyään yleinen suuntaus on käyttää uuttomenetelmiä, jotka ovat helposti automatisoitavia, vähentävät manuaalisia vaiheita ja orgaanisia liuottimia ja mahdollistavat suurten näytemäärien analysoinnin. Nämä vaatimukset täyttyvät kiinteäfaasiuutolla (SPE), joka on vaihtoehto perinteiselle neste-neste-uutolle, jossa näytteenotto yhdistetään konsentroimiseen. Valmiiden kaupallisesti saatavien patruunoiden (patruunoiden) käyttö SPE:tä varten yksinkertaistaa merkittävästi näytteiden valmistelua analyysia varten perinteisiin menetelmiin verrattuna. SPE:tä ei käytetä vain vesianalyysissä, vaan myös maaperän, hedelmien, vihannesten ja muiden elintarvikkeiden analysoinnissa. Näiden matriisien uutteista, jotka on saatu käyttämällä matalapolaarisia ja ei-polaarisia orgaanisia liuottimia, pestisidit väkevöidään sitten molekyylisorbentteihin dipoli-dipolivuorovaikutusten tai vetysidoksen avulla. Näihin tarkoituksiin käytetään silikageelillä, florisililla tai alumiinioksidilla täytettyjä patruunoita. Olemme tehneet systemaattisia tutkimuksia eri luokkien torjunta-aineiden hivenmäärien dynaamisesta sorptioprosessista styreenin ja divinyylibentseenin makroverkkojen ”hypersilloitettuun” kopolymeeriin (polysorb. Näiden tutkimusten tuloksena väkevöitymisen sorptiomenetelmä on kehitetty käyttämällä polysorbilla täytettyjä muovisia rikastuspatruunoita, mikä mahdollistaa torjunta-aineiden nopean määrityksen vedestä, joka on 1-2 suuruusluokkaa pienempi kuin MPC-arvot. On mielenkiintoista huomata, että yhteishankkeessa SMT4-CT96-2142 seitsemän eurooppalaista tutkimuskeskusta Ranskassa, Belgiassa, Saksassa, Alankomaissa, Espanjassa ja Portugalissa, joka aloitti toimintansa vuonna 1997 ja jonka aiheena oli menetelmän kehittäminen juomaveden useiden torjunta-ainejäämien määrittämiseksi SPE:n avulla, mikä mahdollistaa torjunta-aineita vedessä tasolla 0,1 μg/l (Euroopan juomavesidirektiivin 80/778/ETY vaatimusten mukaisesti), tutkittiin yhdeksän sorbenttia eri yhtiöiltä C18- ja SDB-1:n perusteella. Näiden tutkimusten tuloksena havaittiin, että sopivin sorbentti vedestä peräisin olevien torjunta-aineiden SPE:lle oli SDB-1 - sorbentti, joka perustuu styreenin ja divinyylibentseenin kopolymeeriin, jonka tehokkuuden näihin tarkoituksiin totesimme jo vuonna viime vuosisadan 80-luvun alussa.

Viime vuosina sfäärikriittistä neste-uuttoa (SFE) on käytetty torjunta-aineiden uuttamiseen eri matriiseista, jota pidetään vaihtoehtona tavanomaiselle neste-neste-uutolle Soxhlet-laitteistossa. Ylikriittisinä nesteinä käytetään hiilidioksidia, typen oksideja sekä hiilidioksidin ja typpioksidin seoksia metanolin ja tolueenin kanssa. Ylikriittisissä olosuhteissa (lämpötila 40 °C, paine 300 atm) hiilidioksidin solvatointiominaisuudet ovat samanlaiset kuin freonien tai heksaanin. Yksi SFE:n tärkeimmistä eduista on, että kaiken tämän myötä analysoiduista matriiseista erotetaan erilaisten torjunta-aineiden jäämät ja niiden tuhoutumis- ja aineenvaihduntatuotteet, joita ei uuteta perinteisillä menetelmillä, vaikka uuttaminen suoritetaan Soxhlet-laitteistossa. SPE-laitteisto mahdollistaa tämän prosessin täysin automatisoinnin. Torjunta-aineanalyysin alalla työskentelevät ukrainalaiset analyyttiset kemistit eivät ole vielä tutustuneet tähän tehokkaaseen tapaan erottaa torjunta-ainejäämiä maaperästä, kasvimateriaalista ja eläinkudoksesta, mikä mahdollistaa suuren määrän näytteitä uuttamisen. SPE:n suorituskyky on erityisen vaikuttava supertoksisten aineiden, kuten polykloorattujen dibentsodioksiinien ja polykloorattujen dibentsofuraanien, analysoinnissa.

Geelikromatografiaa käytetään nykyään usein menetelmänä uutteiden puhdistamiseen torjunta-ainejäämien analysoinnissa, joko erillisenä menetelmänä tai vaiheena monivaiheisessa puhdistusoperaatiossa. Tämä puhdistusmenetelmä on erityisen tehokas analysoitaessa matriiseja, jotka sisältävät suuria määriä lipidejä. Eniten tätä puhdistusmenetelmää käytetään orgaanisissa liuottimissa toimiville geeleille. On kehitetty automatisoituja yksiköitä, jotka mahdollistavat suurten näytemäärien puhdistamisen ilman laboratorion henkilökunnan huomiota. Osoitimme tämän puhdistusmenetelmän tehokkuuden ensin kotimaisissa tutkimuksissa Saturn- ja Prefix-rikkakasvien torjunta-aineita sisältävien riisiuutteiden puhdistuksessa käyttämällä geelejä, jotka muodostuvat heikosti silloittuneista styreenin ja divinyylibentseenin kopolymeereistä, jotka turpoavat hyvin matalapolaarisissa ja ei-polaarisissa olosuhteissa. -polaariset orgaaniset liuottimet.

Geelikromatografia on monivaiheisen puhdistusoperaation pakollinen vaihe niin sanottujen menetelmien kehittämisessä ja käytössä useiden torjunta-ainejäämien (multiresidue) määrittämiseksi. Käytettyjen torjunta-aineiden määrän ja niiden pääsyn lähteiden lisääntyminen ympäristökohteisiin, maatalouden raaka-aineisiin ja elintarvikkeisiin lisää merkittävästi kemiallisen analyyttisen tutkimuksen määrää. Luonnollisesti erillisen MVI:n käyttäminen kunkin torjunta-aineen määrittämiseen jokaisessa analysoitavassa matriisissa on taloudellisesti kannattamatonta ja hankalaa. Paljon houkuttelevampia ovat metodologiset lähestymistavat, jotka mahdollistavat useiden MVI:iden maatalouskäytännössä käyttämien torjunta-aineiden koko määrän. Tällä lähestymistavalla on useita tärkeitä etuja: ensinnäkin kokonaisanalyysiaika lyhenee merkittävästi; toiseksi näillä tekniikoilla määritettävissä olevien torjunta-aineiden ja niiden aineenvaihduntatuotteiden kokonaismäärä kasvaa jyrkästi, ja kolmanneksi näitä tekniikoita voidaan tarvittaessa mukauttaa nopeasti uusiin analysoituihin matriiseihin ja uusiin torjunta-aineisiin. Tällä hetkellä torjunta-ainepitoisuuden valvonnassa ulkomailla käytetään vain menetelmiä useiden torjunta-ainejäämien määrittämiseen, joiden avulla voidaan määrittää yhdestä maatalouden raaka-ainenäytteestä, elintarviketuotteista, vedestä, maaperästä tai ilmasta lähes kaikki maataloudessa käytettävät torjunta-aineet. harjoitella. Esimerkiksi useiden jäämien määritysmenetelmä AOAS 990.06 mahdollistaa 29 klooriorgaanisen torjunta-aineen määrittämisen yhdestä juomavesinäytteestä. AOAC 991.07 Multiple Residue Test Method on suunniteltu määrittämään 44 organo-typpi- ja organofosforitorjunta-ainetta yhdestä juomavesinäytteestä. Saksan terveysministeriön Multiple Residue Method S 8 on tarkoitettu 91 kloori-, fosfori- ja triatsiinitorjunta-aineen määrittämiseen yhdestä hedelmä- tai vihannesnäytteestä. Useiden jäämien määritysmenetelmä S 19 (Saksa) mahdollistaa 220 kloori-, fosfori- ja typpipitoisen torjunta-aineen määrittämisen yhdestä maanäytteestä. Eurooppalaisen hankkeen SMT4-CT96-2142 menetelmä mahdollistaa 38 torjunta-aineen määrittämisen yhdestä juomavesinäytteestä, jotka ovat menetelmän kehittäneiden maiden prioriteetteja.

Valitettavasti Ukrainassa torjunta-ainejäämien pitoisuuden valvontaan tarkoitettujen MVI:iden kehittämisessä on tähän mennessä käytetty lähestymistapaa, joka muodostettiin entisen Neuvostoliiton valtion kemiallisen tuholaistorjunnan, kasvitautien ja rikkakasvien hallituksessa ja joka koostuu on kehitettävä erillinen menettely jokaiselle torjunta-aineelle ja jokaiselle analysoitavalle matriisille. Tämä kehitys perustuu torjunta-ainetuotetta kehittävän yrityksen esittämiin menetelmiin sekä raporttiin esitettyjen menetelmien validoinnista riippumattoman laboratorion toimesta sekä kenttäkokeiden tuloksiin torjunta-ainejäämien määrittämiseksi viljelykasveissa, maaperässä, vedessä ja ilmassa. työalue. Torjunta-ainetuotteen kehittäjä esittelee nämä menetelmät vain käydäkseen läpi torjunta-aineen valtion rekisteröintimenettelyn Ukrainassa osoittaakseen, että tiedot torjunta-ainejäämistä viljelykasveissa, maaperässä, vedessä ja ilmassa, jota yritys edustaa , saatiin validoiduilla menetelmillä. Siten torjunta-ainetta kehittävän yrityksen esittämät MVI:t palvelevat vain torjunta-aineen valtion rekisteröintiä eivätkä ole MVI:itä, joiden avulla seurataan torjunta-ainejäämien pitoisuutta maatalouden raaka-aineissa, elintarvikkeissa ja ympäristöesineissä. maa, jossa torjunta-aine on kehitetty. Etuoikeus kehittää MVI:itä, jotka on tarkoitettu torjunta-ainejäämien pitoisuuden valvontaan eri ympäristöissä, ei ole ulkomailla annettu torjunta-ainevalmisteiden valmistajille, vaan ministeriöille ja osastoille, jotka vastaavat tästä tai toisesta valvonta-alueesta. Esimerkiksi Yhdysvalloissa näitä ovat Environmental Protection Agency (EPA) ja Food and Drug Administration (FDA).

Siten, jotta voidaan kehittää nykyaikainen strategia MVI:n käyttämiseksi torjunta-ainejäämien määrittämiseen Ukrainassa, on välttämätöntä erottaa selvästi toisistaan ​​MVI, jotka ovat välttämättömiä torjunta-aineiden valtion rekisteröintiä varten, ja MVI:t, jotka on tarkoitettu valtion hygieniaan ja hygieniaan. torjunta-aineiden käytön epidemiologinen seuranta. Torjunta-aineiden valtion rekisteröinnissä seuraava lähestymistapa MVI:n kehittämiseen on taloudellisesti ja metodologisesti perusteltua: yksi torjunta-aine - yksi viljelykasvi/ympäristö - yksi MVI. Tällaisten MVI:iden kehitys perustuu torjunta-aineita kehittävien yritysten esittämiin menetelmiin. Tällä tavalla kehitettyjä MVI:itä käytetään torjunta-ainejäämien määrittämiseen maatalouden raaka-aineista, maaperästä, vedestä ja työalueen ilmasta vain torjunta-aineiden esirekisteröintitilatesteissä. Torjunta-aineiden käytön valtion terveys- ja epidemiologisen valvonnan kannalta ovat luonnollisesti välttämättömiä MVI:t, joiden kehittäminen perustuu periaatteeseen, että yhdestä näytteestä määritetään useita torjunta-ainejäämiä. Tällaisten MVI:iden käyttö vähentää merkittävästi sekä niiden kehittämisen että myöhemmän torjunta-aineiden käytön saniteetti- ja epidemiologisen seurannan kustannuksia. Tällä hetkellä kysymys on torjunta-aineiden seurantajärjestelmän toiminnan uudelleen käynnistämisestä, joka aikoinaan (1984-1991) kehitettiin VNIIGINTOXissa (nykyinen L.I. Medved Institute of Ecohygiene and Toxicology) ja otettiin osaksi terveys- ja epidemiologisen verkoston käytäntöä. Ukrainan terveysministeriön asemia harkitaan . Tällaisen seurannan tulisi perustua vain useiden torjunta-ainejäämien määritystekniikoihin. Olemme analysoineet maatalousraaka-aineissa, elintarvikkeissa ja ympäristön kohteissa olevien torjunta-ainejäämien valvontajärjestelmän aiemman toiminnan kemiallisia ja analyyttisiä näkökohtia ja hahmotelleet tapoja nykyaikaistaa tätä järjestelmää ja metodologisia lähestymistapoja useiden torjunta-ainejäämien määritysmenetelmien kehittämiseen hedelmät, vihannekset ja vesi.

Kromatografiset menetelmät ovat edelleen tärkein työkalu torjunta-aineiden analyyttisessä kemiassa. Kehitysvauhdilla mitattuna kapillaarikaasukromatografia (GC), korkean erotuskyvyn nestekromatografia (HPLC) ja kaasukromatografia-massaspektrometria (GC/MS, LC/MS) ovat joukossa ensimmäisiä. Kapillaari-GC:llä ei ole vaihtoehtoa kehitettäessä menetelmiä useiden torjunta-ainejäämien määrittämiseen.

Useita Ukrainan maataloudessa käytettäviä torjunta-aineita ei voida kohdistaa suoraan kaasukromatografiseen määritykseen niiden alhaisen haihtuvuuden tai riittämättömän lämpöstabiilisuuden vuoksi. Jotta nämä yhdisteet olisi mahdollista määrittää GC:llä, ne muunnetaan erilaisiksi johdannaisiksi. Tämä toimenpide yleensä lisää haihtuvuutta ja vähentää kromatografoitujen yhdisteiden adsorptiota kiinteille alustoille, lisää niiden lämpöstabiilisuutta ja parantaa erotusta. Joissakin tapauksissa kaikella tällä saavutetaan myös merkittävä lisäys tuloksena olevien johdannaisten havaitsemisen herkkyydessä. Kaikki tämä on reaktiokaasukromatografian aihe. Olemme ensimmäistä kertaa kotimaisessa tutkimuksessa osoittaneet reaktiivisen kaasukromatografian käytön tehokkuuden torjunta-aineiden analyysissä käyttämällä esimerkkiä rikkakasvien torjunta-aineiden jäännösmäärien määrittämisestä - fjohdannaiset (2,4-D, 2,4-DM) elintarvikkeissa. Siitä lähtienmää on käytetty laajalti instituutin laboratorioissa tehtäessä torjunta-aineiden valtiontestejä ja suoritettaessa valtion terveys- ja hygieniatarkastuksia.

HPLC-menetelmä on osoittanut tiettyjä etuja torjunta-aineiden ja niiden metaboliittien yhteismäärityksessä yhdestä näytteestä. Tämä pätee erityisesti niihin torjunta-aineisiin, joita ei voida määrittää GC:llä niiden termisen epävakauden, korkean polariteetin ja alhaisen haihtuvuuden vuoksi. HPLC:n käyttö torjunta-aineiden analysoinnissa eliminoi työvoimavaltaisten derivatisointitoimenpiteiden tarpeen. Instituutti oli yksi ensimmäisistä Ukrainassa, joka käytti tätä menetelmää torjunta-aineiden määrittämiseen. Tällä hetkellä HPLC on rutiinianalyysimenetelmä monissa instituutin laboratorioissa. Tätä menetelmää käytetään erityisen laajalti elintarvikkeiden valtion terveys- ja hygieniatarkastuksessa.

Kun luetellaan kromatografisia menetelmiä, joita käytetään torjunta-ainejäämien analysoinnissa, ei voida jättää mainitsematta ohutkerroskromatografiamenetelmää (TLC), jonka ukrainalaiset tutkijat N. A. Izmailov ja M. S. Schreiber löysivät vuonna 1938. TLC:n puolikvantitatiivinen versio on edelleen halpa ja tehokas menetelmä torjunta-ainejäämien erottamiseen, tunnistamiseen ja puolikvantitatiiviseen määritykseen. TLC:n puolikvantitatiivisella versiolla oli suuri rooli Ukrainan terveysministeriön kemiallisen analyyttisen palvelun kehittämisessä, joka valvoo torjunta-ainejäämien sisältöä elintarvikkeissa ja ympäristössä, kun GC- ja HPLC-menetelmiä ei vielä ollut käytössä. saatavilla laajaan käyttöön. Tämä johtui suurelta osin instituutin seinien sisällä tehdystä työstä. Tällä hetkellä TLC:tä torjunta-ainejäämien analysoinnissa käytetään pääasiassa vaihtoehtoisena analyysimenetelmänä GC- ja HPLC-menetelmillä saadun torjunta-aineen tunnistamisen oikeellisuuden varmistamiseksi. TLC on myös välttämätön työkalu torjunta-ainejäämien analysoinnissa, kun on tarpeen testata erittäin suurta määrää elintarvike- tai ympäristönäytteitä torjunta-aineiden esiintymisen varalta. Tällaisissa tapauksissa käytetään yleensä seulontamenetelmää. Kaikki näytteet, jotka antavat "positiivisen" reaktion, tutkitaan edelleen jollain tarkemmalla instrumentaalimenetelmällä (GC, HPLC, GC/MS, LC/MS), kun taas kaikki negatiiviset seulontatulokset hyväksytään lopullisiksi ilman minkäänlaista varmennusta. Instituutilla on joukko laitteita kvantitatiiviseen TLC:hen (KAMAG-yritys, Saksa). TLC:n jatkokäytön torjunta-aineiden analysoinnissa tulisi kuitenkin ensisijaisesti yhdistää tämän menetelmän puolikvantitatiiviseen versioon. Tälle ei ole vaihtoehtoa.

Jokaiselle torjunta-aineiden käytön vaiheelle maailman maatalouskäytännössä viime vuosisadan 40-luvun lopulta nykypäivään voidaan luonnehtia omat kemialliset ja analyyttiset ongelmansa. Yksi ongelma torjunta-ainejäämien analysoinnissa on kuitenkin pysynyt muuttumattomana - tarve jatkuvasti pienentää torjunta-aineiden kvantifiointirajoja (LOQ). Hyvin alhaisten kvantifiointirajojen saavuttamiseen MVI:tä käytettäessä seuraa analyysituloksen luotettavuustason (tunnistuksen luotettavuuden) lasku. Usein erittäin alhaisten kvantifiointirajojen saavuttamiseksi on tarpeen käyttää monimutkaista monivaiheista puhdistusmenettelyä ja derivatisointivaihetta, jotta voidaan käyttää erittäin selektiivisiä ja erittäin herkkiä ilmaisimia (ECD, TID). Tähän liittyy kuitenkin väistämättä analyytin häviöitä näiden toimenpiteiden aikana, mikä johtaa analyysivirheiden lisääntymiseen. Lisäksi analysoitavan matriisin koostumuksen vaihtelu näytteestä toiseen vaikuttaa myös. Tässä suhteessa analyyttinen kemisti ei voi aina tyydyttää hygienistin ja toksikologin toivetta saada MVI, jonka kvantifiointirajat ovat erittäin alhaiset käytettyjen instrumenttien teknisten ominaisuuksien ja kehitetyn MVI:n metodologisten rajoitusten vuoksi. MVI:itä kehitettäessä analyyttisen kemistin ei tulisi keskittyä pelkästään analysoitavien torjunta-aineiden kvantitatiivisten rajojen saavuttamiseen, mutta ei saa unohtaa torjunta-ainejäämien analyysin tärkeämpiä näkökohtia: tunnistamisen luotettavuutta ja tulosten toistettavuutta. Tiedetään, että nykyään Ukrainassa joissakin maatalouskasveissa ja elintarvikkeissa torjunta-aineiden pitoisuus ei ole sallittua (ns. nollatoleranssit) tai se on havaitsemisrajalla (LOD), eli havaittavissa olevia torjunta-ainejäämiä ei pidetä hyväksyttävinä. Tällaisissa tapauksissa torjunta-aineen tunnistamisen luotettavuus on ensiarvoisen tärkeää sen sijaan, että sen pitoisuus määritetään tarkasti määrällisesti, koska jo torjunta-aineen havaitseminen on perusta maatalouden raaka-aineiden tai elintarvikkeiden käytön kieltämiselle. . Näissä tapauksissa puolikvantitatiivisen TLC:n käyttö on täysin perusteltua edellyttäen, että määritettävä torjunta-aine tunnistetaan luotettavasti.

Ymmärtäen torjunta-ainejäämien analyysissä määritettävien yhdisteiden tunnistamisvarmuuden lisäämiseen liittyvien kysymysten tärkeyden, toteutimme systemaattisia tutkimuksia klooria ja typpeä sisältävien torjunta-aineiden molekyylien välisten vuorovaikutusten selvittämiseksi kaasu- ja nestekromatografiassa. Samalla todettiin ensimmäistä kertaa korrelaatioiden olemassaolo kromatografisilla menetelmillä eri sorptiomekanismeilla saatujen homologisten sorbaattisarjojen jäsenten retentioparametrien välillä. Tällaisten riippuvuuksien käytön tehokkuus torjunta-aineiden tunnistuksen luotettavuuden lisäämiseksi osoitettiin esimerkillä homologisista kloorialkaanikarboksyyli- ja kloorifja niiden esterien, kloorifenolien, substituoitujen fenyyliureoiden, nitrofenolien ja nitrofenolisubstituoitujen bentsotriatsoimiyhdisteiden, happoesterit. 9

Luku 3. OHJEET ORGANOKLORIIN TORJUNTA-AINEIDEN MÄÄRITTÄMISEKSI VEDESSÄ, ELINTARVIKKEESTA, REHUSTA JA TUPAKATUOTTEISTA OHUTKERROSKROMATOGRAFIALLA

Tätä tekniikkaa on testattu ja suositeltu virallisena asiantuntijaryhmänä tuholaisten, kasvitautien ja rikkakasvien kemiallisen torjunnan valtiokomissiossa Neuvostoliiton maatalousministeriön alaisuudessa.
Näitä ohjeita sovelletaan DDT:n, DDE:n, DDD:n, heksokloraanin, aldriinin, keltaanin, heptakloorin, metoksikloorin, daktaalin, tedionin ja eetterisulfonaatin pitoisuuden määrittämiseen vedessä, maaperässä, viinissä, vihanneksissa, hedelmissä, sienissä, viljassa, rehuseoksessa, juurissa. mukulat ja viherrehu, kala, liha, lihatuotteet, sisäelimet, maito ja maitotuotteet, eläinrasva, voi ja kasviöljyt, kakut, ateriat, kuoret, hunaja, sokeri, munat ja munatuotteet sekä tupakkatuotteet.

Menetelmän periaate. Menetelmä perustuu klooria sisältävien torjunta-aineiden kromatografiaan ohuella alumiinioksidi-, silikageeli- tai Silufol-levykerroksella erilaisissa liikkuvien liuottimien järjestelmissä niiden uuttamisen jälkeen tutkittavista näytteistä ja uutteiden puhdistamisesta. Liikkuva liuotin on n-heksaani tai n-heksaani sekoitettuna asetonin kanssa. Lääkkeiden sijaintipaikat havaitaan sen jälkeen, kun levyt on ruiskutettu hopeaammoniakkiliuoksella ja sen jälkeen ultraviolettisäteilytys, tai sen jälkeen, kun o-tolidiinia sisältäviä Silufol-levyjä on säteilytetty ultraviolettivalolla.

Reagenssit ja liuokset

Reagenssilaatuinen asetoni, GOST 2603-71

Ammoniakkivesireagenssilaatu, GOST 3760-64

Alumiinioksidi 2 rkl. aktiivisuus kromatografiaa varten, h, MRTU 6-09-5296-68. Siivilöi 100 meshin siivilän läpi.

Alumiinioksidi, joka on kyllästetty rikkihapolla. Kaksi paino-osaa alumiinioksidia (tai piioksidia) asetetaan posliinilaastiin, kaadetaan tilavuusosalla rikkihappoa ja sekoitetaan huolellisesti. Seos valmistetaan välittömästi ennen kolonnien valmistusta uutteiden puhdistamiseksi jauho-, kakku- ja kuorinäytteistä

Bentseenireagenssilaatu, GOST 5955-68

N-heksaani h, MRTU 6-09-2937-66

Kaliumoksalaatti, analyyttinen laatu, GOST 5868-68

Kalsiumsulfaatti, analyyttinen laatu, GOST 3210-66. Kuivaa 6 tuntia kuivauskaapissa 160 asteessa. C. Siivilöi 100 meshin seulan läpi.

Piioksidi fosforeille h, MRTU 6-09-4875-67

Vedetön natriumsulfaatti, GOST 4166-66

Natriumkarbonaattihapporeagenssilaatu, GOST 4201-66, 0,5 N. ratkaisu

Natriumkloridi, reagenssilaatu, GOST 4233-66, kyllästetty liuos

Petrolieetteri (kiehumislämpötila 40-70 astetta)

Kemiallinen vetyperoksidi (30 % vesiliuos), GOST 10929-64

Kehitettävät reagenssit:

Kehitysreagenssi nro 1. 0,5 g hopeanitraattia liuotetaan 5 ml:aan tislattua vettä, lisätään 7 ml ammoniakkia ja liuoksen tilavuus säädetään 100 ml:ksi asetonilla; Voit lisätä 0,2 ml vetyperoksidia valmiiseen liuokseen. Liuosta tulee säilyttää jauhetussa pullossa pimeässä paikassa 3 päivää. 9 x 12 cm:n levyä kohti kuluu 8-10 ml liuosta. Kehitysreagenssi nro 2. 0,5 g hopeanitraattia liuotetaan 5 ml:aan tislattua vettä, lisätään 10 ml 2-fenoksietanolia ja liuoksen tilavuus säädetään 200 ml:ksi asetonilla, sitten 6 tippaa 30-prosenttista vetyperoksidia lisätään.

Hopeanitraatti, analyyttinen laatu, GOST 1277-63

Rikkihappo, h, GOST 4204-66

Silikageeli ASK (Voskresenskyn kemiantehdas, Moskovan alue)

Silikageeli KSK, seulotaan 100 meshin seulan läpi.

Vakionäytteet:

DDT, DDD, DDE, aldriini, HCCH-isomeerit, heptakloori, metoksikloori, keltaani, eetterisulfonaatti, daktaali, reagenssilaatuinen tedioni.

Standardiliuokset: Liuotetaan 10 mg sopivaa torjunta-ainetta 100 ml:n mittapullossa n-heksaaniin ja täytetään merkkiin tällä liuottimella. Vakioliuokset on säilytettävä jääkaapissa lasiastioissa, joissa on hiotut tulpat.

Lasivilla, puhdistettu kons. rikkihappo, pestiin tislatulla vedellä ja kuivattiin o-Tolidin h, MRTU 6-09-6337-69, 1 % liuos asetonissa 2-fenoksietanoli

Etyylialkoholi, rektifioitu, TU 19-11-39-69

Kloroformireagenssilaatu, GOST 200-15-74

Hiilitetrakloridi, reagenssilaatu, GOST 20228-74

Etyylieetteri (anestesiaa varten), Neuvostoliiton farmakopea

Natriumsulfaatti, 2 % vesiliuos

Natriumsulfaatti, kyllästetty liuos

2.4. Ruokailuvälineet ja astiat

Vesihaude, TU 64-1-2850-76

Tyhjiöpyöröhaihdutin, IR TU 25-11-310-69 tai laite liuotintislaukseen, MRTU 25-11-67-67

Kemialliset suppilot, halk. 6 cm, GOST 86-13-64

Erotussuppilot, tilavuus 100, 250, 500 ml, GOST 10054-75

Buchner-suppilot, GOST 9147-69

Homogenisaattori tai kudosmylly

Suihkukammio, TU 25-11-430-70

Kammio kromatografiaa varten, koko 150 x 200, 105 x 165 mm, GOST 10565-63

Bunsen-pullot, TU 25-11-135-69

Mittapullot, tilavuus 50, 100 ml, GOST 1770-74

Pullot nsh, tilavuus 100, 250, 500 ml, GOST 10394-63

Pyöreäpohjaiset pullot nsh, tilavuus 150, 250, 500 ml, GOST 10394-63

Mikropipetit, GOST 1770-74 (standardiliuosten levittämiseen)

Pipetit tai ruiskut näytteiden levittämiseen

Pipetit, joiden tilavuus on 1, 5, 10 ml, GOST 1770-74

Ravistelulaite, MRTU 2451-64

Lasilevyt 9 x 12, 13 x 18 cm

Lasisumuttimet levyjen ruiskutukseen

100 meshin seula (reiän halkaisija 0,147 mm)

Lasikromatografiakolonnit (halkaisija - korkeus), 20 x 400, 15 x 150

Elohopea-kvartsilamppu

Mittasylinterit, joiden tilavuus on 25, 50, 100, 250, 500 ml, GOST 1770-74

Haihdutuskupit N 3, N 1, GOST 9147-69

Kromatografialevyjen valmistus

Levy, joka pestään perusteellisesti kromiseoksella, soodaliuoksella, tislatulla vedellä ja kuivataan, pyyhitään etyylialkoholilla tai eetterillä ja

peitetty sorptiomassalla. Massa valmistetaan seuraavasti:

a) 50 g seulotaan 100 meshin seulan läpi. alumiinioksidia sekoitetaan posliinihuhmareessa 5 g:n kanssa kalsiumsulfaattia, lisätään 75 ml

tislattua vettä ja sekoita huhmareessa tai pullossa, kunnes muodostuu homogeeninen massa. 10 g sorptiomassaa levitetään 9 x 12 cm:n levylle (20 g 13 x 18 cm:n levylle) ja jaetaan ravistellen tasaisesti koko levylle. Levyjä kuivataan huoneenlämmössä 18 - 20 tuntia, voit kuivata 20 minuuttia huoneenlämmössä ja sitten 45 minuuttia uunissa 110 asteen lämpötilassa. C.

b) 35 g KSK-silikageeliä, seulotaan 100 meshin seulan läpi, sekoitetaan 2 g:aan kalsiumsulfaattia ja 90 ml:aan tislattua vettä ja sekoitetaan huhmaressa tai pullossa tasaiseksi. Levitä levyille ja kuivaa edellä kuvatulla tavalla. Annos on 10 lautaselle.

Jos levyt, joissa on ohut kerros silikageeliä, tummuvat UV-säteilyn jälkeen, silikageeli tulee puhdistaa epäpuhtauksista ennen käyttöä. Tätä varten silikageeli kaadetaan laimennetulla kloorivetyhapolla (1:1) 18 - 20 tunnin ajan, happo valutetaan pois, silikageeli pestään vedellä ja keitetään pyöreäpohjaisessa pullossa 2 - 3 tuntia laimennettuna. typpihappo (1:1), pestään juoksevalla vesijohtovedellä, sitten tislatulla vedellä, kunnes pesuvesi reagoi neutraalisti, kuivataan uunissa 4-6 tuntia 130 asteen lämpötilassa. Silikageeli murskataan ja siivilöidään 100 meshin seulan läpi.

Tsekkoslovakiassa valmistetut Silufol UV-254 kromatografialevyt kyllästetään o-tolidiinilla ennen käyttöä. Tätä varten kukin levy lasketaan 0,5 cm 0,1-prosenttiseen o-tolidiinin asetoniliuokseen ja kaadetaan kromatografiakammioon. Kun liuotinrintama nousee levyn yläreunaan, se poistetaan ja kuivataan ilmassa välttäen suoraa auringonvaloa. Tämän jälkeen tietueet ovat valmiita käyttöön. O-tolidiinilla kyllästetyt levyt säilytetään eksikkaattorissa. Käytetään rehuanalyysissä.

"Silufol" UV-254 levyt valmistettu Tšekkoslovakiassa pestään tislatulla vedellä kromatografisessa kammiossa, kuivataan ilmassa ja aktivoidaan välittömästi ennen käyttöä kuivauskaapissa 65 asteen lämpötilassa. 4 minuutin sisällä. Kromatografisten pylväiden valmistus uutteen puhdistamista varten

Kromatografinen kolonni maitorasvan puhdistamiseen. Kromatografiakolonnin (koko 20 x 400 mm) alaosaan laitetaan lasivillaa tai 500 mg rasvatonta puuvillaa. Kaada sitten ASA-silikageeli pylvääseen (75 ml sianrasvanäytteiden uutteiden puhdistamiseen ja 70 ml kaikkiin muihin näytteisiin) ja tiivistä silikageeli koputtamalla kolonnia. Pylväs pestään 50 ml:lla n-heksaania tai petrolieetteriä ja sen läpi kulkenut liuotin heitetään pois. Tämän jälkeen kolonni on valmis kala-, liha- ja lihatuotteiden, maidon ja maitotuotteiden, hunajan, munien jne. näytteistä saatujen uutteiden kromatografiseen puhdistukseen.

Kromatografinen pylväs uutteiden puhdistamiseen jauhonäytteistä (ei rikastettu lipideillä) ja kuorista.

Kromatografinen kolonni täytetään 1 cm:n korkeuteen lasivillalla, sitten kolonniin lisätään seulottua alumiinioksidia (I) 2,5 cm:n kerrokseksi tai piioksidia - 3,5 cm. Sitten ilman tiivistämistä alumiinioksidipaakkuja ( rikkihapossa liotettua piitä) lisätään, kerroksen (II) korkeus 2,5 cm. Jokainen kerros pestään peräkkäin heksaanilla (yhteensä 20-30 ml).

Lipideillä rikastettujen kakkujen ja aterioiden analysoimiseksi alumiinioksidia tulisi lisätä 5 cm:iin (I) ja 3 cm:iin (II), piioksidia käytettäessä - 6 cm (I) ja 3 cm (II).

Vettä, viiniä. 200 ml näytettä asetetaan erotussuppiloon ja torjunta-aineet uutetaan ravistamalla 3 minuuttia n-heksaanilla tai petrolieetterillä kolmessa 30 ml:n annoksessa tai dietyylieetterillä kolmessa 50 ml:n annoksessa. 10 g vedetöntä natriumsulfaattia kaadetaan yhdistettyihin uutteisiin tai suodatetaan suppilon läpi, joka on täytetty 2/3 natriumsulfaatilla. Uutteet siirretään liuotintislauslaitteeseen ja liuotin tislataan pois 0,2 - 0,3 ml:n tilavuuteen. Tarvittaessa uute puhdistetaan rikkihapolla.

Vihannekset hedelmät. 20 g murskattua näytettä laitetaan jauhetulla tulpalla varustettuun pulloon ja torjunta-aineita uutetaan kolme kertaa 15 minuutin ajan ravistelulaitteella n-heksaanilla tai petrolieetterillä 30 ml:n erissä. Yhdistetyt uutteet kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla, siirretään laitteeseen liuottimien poistislaamiseksi, liuotin tislataan pois tilavuuteen 0,2 - 0,3 ml ja levitetään levylle.

Viljaa, sieniä. Murskatuista näytteistä otetaan 20 g jyviä, 50 g raakaa tai 10 g kuivattuja sieniä ja laitetaan pulloihin, joissa on jauhettu tulppa. Torjunta-aineiden uuttaminen suoritetaan kolme kertaa ravistelulaitteella n-heksaanilla tai petrolieetterillä 30 ml:n erissä. Yhdistetyt uutteet siirretään erotussuppiloon, lisätään 10 ml vedettömän natriumsulfaatin kylläistä liuosta rikkihapossa ja ravistellaan varovasti useita kertoja. Erota orgaaninen kerros ja toista käsittely, kunnes happo muuttuu värittömäksi. Uute pestään tislatulla vedellä, kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla ja liuotin tislataan pois.

Omenat, kaali, ruoho, heinä. 20 g hienonnettuja omenoita, 20 g kaalia, 40 g ruohoa ja 20 g heinää kaadetaan 100 ml:aan asetonia jauhetussa pullossa. Ravista 2-3 minuuttia, lisää 20 ml tislattua vettä ja jäähdytä jäillä 30 minuuttia. Uute valutetaan ja suodatetaan kylmänä, ja uutto toistetaan. Asetoni tislataan pois yhdistetyistä vesipitoisista asetoniuutteista ja valmisteet uutetaan vesipitoisesta jäännöksestä n-heksaanilla kolmessa 10 ml:n erässä 10 minuutin ajan. Heksaaniuutteet puhdistetaan rikkihapolla, joka on kyllästetty vedettömällä natriumsulfaatilla. Kuivaa vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin tislataan pieneen tilavuuteen ja levitetään levylle. Jos puhdistus on epätäydellinen (liuotin haihtumisen jälkeen pulloon jää valkoinen pinnoite), uute haihdutetaan kunnes se on kuiva, jäännös pestään pois kylmällä asetonilla 3 kertaa 0,2 ml:n erissä ja levitetään välittömästi levylle.

Rehuseos. Ota tutkimusta varten 40 g näyte ja kostuta se pullossa 60 ml:lla tislattua vettä. Kostutettu näyte jätetään yön yli suljetussa pullossa. Torjunta-aineiden uuttaminen suoritetaan kahdesti 50-100 ml:lla heksaani-asetoni-seosta 1:1 ravistellen 2 tunnin ajan. Uutteet yhdistetään 500 ml:n erotussuppiloon, lisätään kahdesti 50 ml tislattua vettä ja kerrosten erottamisen jälkeen alempi vesikerros kaadetaan toiseen erotussuppiloon ja torjunta-aineet uutetaan 40 ml:lla heksaania. Vesikerros valutetaan. Heksaaniuutteet yhdistetään ja suodatetaan suppilon läpi, jossa on paperisuodatin, joka on täytetty 2/3 vedettömällä natriumsulfaatilla. Uutteet haihdutetaan pyöröhaihduttimessa 20-30 ml:n tilavuuteen tai kuiviin, sitten liuotetaan kuiva jäännös 20-30 ml:aan heksaania tai petrolieetteriä. Uute siirretään erotussuppiloon ja puhdistetaan rikkihapolla edellä kuvatulla tavalla.

Ateria, kuori, kakku. Painot: 15 g lipideillä rikastettua ateriaa tai kakkua; 20 g jauhoa tai kuoria, joita ei ole rikastettu lipideillä, jaetaan yhtä suuriin osiin ja laitetaan 100-250 ml:n pulloihin, joissa on jauhettu tulppa ja täytetään heksaanilla (kolme tilavuutta heksaania per paino-osa ateriaa) ja ravistetaan ravistamalla laitetta 30 minuuttia. Uute suodatetaan Buchner-suppilon läpi ilman, että sakka siirretään suppiloon. Määrätty määrä heksaania täytetään uudelleen pulloon, ravistellaan 30 minuuttia, suodatetaan ja sakka siirretään kvantitatiivisesti Buchner-suppiloon käyttämällä 30 ml heksaania (3 kertaa 10 ml). Saatu uute haihdutetaan 30 ml:aan pyöröhaihduttimessa tai ilmavirrassa enintään 40 asteen lämpötilassa, loppuosa jaetaan kahteen yhtä suureen osaan ja laitetaan jääkaapin pakastimeen 1 tunniksi (vähintään). Jokainen osa johdetaan erillisen alumiinioksidipylvään läpi nopeudella 2 ml/minuutti, pestään pullo ja kolonni 50 ml:lla jäähdytettyä etyylieetterin ja heksaanin seosta (15:85). Tämä toimenpide on suoritettava keskeytyksettä, jättämättä sitä seuraavaan päivään. Puhdistetut uutteet yhdistetään ja haihdutetaan 1 ml:n tilavuuteen. Kolvista saatu jäännös siirretään kvantitatiivisesti mikropipetillä kumipallolla 1 ml:n koeputkeen, pullo ja mikropipetti pestään 2 - 3 kertaa pienellä määrällä heksaania (yhteensä 0,3 - 0,5 ml) kaatamalla se sama koeputki. Haihduta sitten varovasti heksaani koeputkesta vesihauteessa 50°:n lämpötilassa lähes kuiviin (lopullinen tilavuus noin 2-3 tippaa). Jos uutteen ja pesunesteen kokonaistilavuus on yli 1 ml, haihdutetaan ensin uute, lisäämällä siihen vähitellen pesunestettä. Jos haihdutetussa uutteessa on valkoista, voidetta muistuttavaa sakkaa, lisää koeputkeen 5-6 tippaa heksaania ja aseta se jääkaapin pakastimeen 15-20 minuutiksi, jonka jälkeen dekanoi kahdesti samalla määrällä heksaania. ja haihdutetaan uudelleen 2-3 tippaa lopulliseen tilavuuteen.

Rinnakkain testinäytteiden kanssa valmistetaan kaksi malliuutetta. Jokainen uute saadaan yhdestä grammasta jauhoa, joka ei sisällä torjunta-aineita (kuiva-aineen suhde torjunta-aineeseen on sama kuin tutkituissa näytteissä). Ennen pylväspuhdistusta yksi uutteista syötetään mikroruiskulla (mikropipetillä) määritettäviä torjunta-aineita 3 μg ja toiseen - 0,75 μg. Haihdutetut testi- ja malliuutteet levitetään kvantitatiivisesti levylle mikropipetillä tai mikroruiskulla ja pestään koeputki kolme kertaa pienellä määrällä heksaania.

Kala, liha ja lihatuotteet. Liha ja lihatuotteet kuljetetaan lihamyllyn läpi. Kala puhdistetaan suomuista ja sisäelimistä ja viedään myös lihamyllyn läpi. 20 g näytettä sekoitetaan vedettömän natriumsulfaatin kanssa ja laitetaan jauhetulla tulpalla varustettuun pulloon. Torjunta-aineita uutetaan kahdesti heksaani-asetoni tai petrolieetteri-asetoni-seoksella suhteessa 1:1 50 ml:n erissä 1,5 tunnin ajan ravistellen.

Uute suodatetaan suppilon läpi paperisuodattimella, joka on täytetty 2/3 vedettömällä natriumsulfaatilla, sitten liuotin tislataan pois, kuiva jäännös liuotetaan 20 ml:aan n-heksaania ja lisätään silikageeli-ASA-kolonniin. Kun uute on imeytynyt sorbenttiin, torjunta-aine eluoidaan 110 ml:lla bentseenin ja heksaanin seosta suhteessa 3:8 25 - 30 ml:n erissä. Eluaatti kerätään pyöreäpohjaiseen pulloon, jossa on jauhettu osa ja jonka tilavuus on 250 - 300 ml. 10 minuuttia sen jälkeen, kun viimeinen liuottimen osa on imeytynyt, sorbentti puristetaan pois päärynällä. Eluaatti tislataan 0,1 ml:n tilavuuteen ja laitetaan kromatografiselle levylle.

Jos liha- tai kalanäytteet sisältävät suuren määrän rasvaa, ensimmäisen uuttoaineen (asetonin ja heksaanin seos) haihduttamisen ja kuivan jäännöksen heksaaniin liuottamisen jälkeen heksaaniuute tulee puhdistaa rikkihapolla ja sitten pylväspuhdista kuvailtu yläpuolella.

Eläinrasva, munat, munajauhe. Rasva jauhetaan lihamyllyssä, munajauhe sekoitetaan perusteellisesti, munat erotetaan keltuaisesta, keltuainen ja valkuainen punnitaan ja vain keltuainen otetaan analyysiin. Lopullinen tulos kananmunan orgaanisten klooripitoisten torjunta-aineiden pitoisuudesta annetaan koko munalle. Keltuainen sekoitetaan perusteellisesti. 25 g valmistettua näytettä kaadetaan 50 ml:aan asetonia, sekoitetaan ja kuumennetaan kuumassa vesihauteessa, kunnes liuotin kiehuu. Kolvi jäähdytetään, siihen lisätään 10 ml jäähdytettyä 2 % natriumsulfaattiliuosta, sekoitetaan ja jäähdytetään 45 minuuttia jäähauteessa. Kaada sitten asetonikerros pyöreäpohjaiseen pulloon rasvattoman puuvillakerroksen läpi. Uutto asetonilla ja sen jälkeen rasvan jäädyttäminen toistetaan vielä kaksi kertaa. Asetoni tislataan pois yhdistetyistä uutteista pyöröhaihduttimella tai liuottimien poistislauslaitteessa (kylvyn lämpötila enintään 70 astetta +/- 2 astetta) ja uutetaan kolme kertaa petrolieetterillä 20, 10 ja 10 ml:n annoksina. . Ensimmäisen uuton kesto on 1 tunti, seuraavat 15 minuuttia. Petrolieetteri siirretään erotussuppiloon 40 ml:n kanssa 2-prosenttista natriumsulfaatin vesiliuosta, sekoita sisältöä 2 minuuttia, anna kerrosten erottua ja hävitä vesifaasi. Kerrosten erottumisen parantamiseksi voit lisätä muutaman ml:n kyllästettyä natriumsulfaattiliuosta. Uutteen pesu toistetaan vielä kaksi kertaa, minkä jälkeen petrolieetteri kaadetaan lasiin, jossa on 20 g vedetöntä natriumsulfaattia, ja erotussuppilo huuhdellaan kahdesti 5 ml:lla petrolieetteriä. Kuivattu uute siirretään kvantitatiivisesti 50 ml:n mittasylinteriin ja liuoksen tilavuus säädetään 30 ml:ksi petrolieetterillä. Levitä seuraavaksi 30 ml uutetta ASA-silikageelikolonniin edellä kuvatulla tavalla. Lisää sianrasvanäytteisiin 75 ml ASA-silikageeliä, kaikkiin muihin näytteisiin 70 ml. Uutteiden puhdistus suoritetaan lihanäytteiden kohdalla kuvatulla tavalla. Eluaatti kerätään 150 ml:n pyöreäpohjaiseen pulloon, liuotin haihdutetaan muutaman pisaran tilavuuteen ja laitetaan kromatografialevylle.

Hunaja. 30 g hunajaa sekoitetaan 3 g:aan vedetöntä natriumsulfaattia ja torjunta-aineet uutetaan kolme kertaa heksaanilla 30 ml:n erissä 15 minuutin ajan, hankaamalla hunajaa perusteellisesti lasisauvalla kapeassa dekantterilasissa. Uutteet yhdistetään ja heksaani tislataan pois 30 ml:n tilavuuteen tai pienempään tilavuuteen, jonka jälkeen uute saatetaan 30 ml:ksi heksaanilla. 30 ml uutetta lisätään kromatografiseen kolonniin ASA-silikageelillä ja uute puhdistetaan ja liuotin haihdutetaan edellä kuvatulla tavalla.

Sokeri. Ennen veteen liuotettua 50 g:n sokerinäytteestä torjunta-aineet uutetaan 250 ml:n erotussuppilossa n-heksaanilla. Torjunta-aineiden uuttaminen suoritetaan kolme kertaa 50, 25 ja 25 ml:lla liuotinta, joka kerta ravistaen 5 minuuttia. Yhdistetyt heksaaniuutteet puhdistetaan rinnakkaisuuttoaineista (värit, aminohapot, lipidit) rikkihappomenetelmällä.

Maito ja maitotuotteet. Voit valmistaa näytteitä jollakin seuraavista tavoista.

Ensimmäinen tapa. Kerma, smetana, maito ja muut täysmaitotuotteet. Ota analyysiä varten 20 g kermaa ja smetanaa, jotka on aiemmin laimennettu yhtä suuri määrä tislattua vettä, 50 ml maitoa, kefiiriä jne., lisää väkevää rikkihappoa (30-40 ml), kunnes näyte on täysin musta. Jäähtynyt 10-15 asteeseen. liuos siirretään erotussuppiloon ja valmisteet uutetaan heksaanilla 2 kertaa 25 ml:n erissä. Täydellisen uuton varmistamiseksi ravista suppiloa 2 minuuttia ja anna sen sitten vaikuttaa 30 minuuttia, kunnes kerrokset ovat täysin eronneet. Jos muodostuu emulsio, lisää 1-2 ml etyylialkoholia. Lisää 10 ml natriumsulfaatilla kyllästettyä väkevää rikkihappoa yhdistettyihin uutteisiin erotussuppilossa ja ravista kevyesti useita kertoja. Puhdistusta jatketaan, kunnes saadaan väritöntä rikkihappoa.

Raejuustoa, juustoa. 50 g raejuustoa tai 10 g juustoraastetta kaadetaan 40 ml:lla heksaania tai petrolieetteriä, ravistellaan jatkuvasti 2-3 minuuttia ja jätetään 30 minuutiksi. Uutto toistetaan. Yhdistetyt uutteet erotussuppilossa puhdistetaan rikkihapolla kuten edellä.

Toinen tapa. Maito, kefiiri, jogurtti, kumissi ja muut täysmaitotuotteet. Laita 25 ml tuotetta 300 ml:n erotussuppiloon, lisää 5 ml kaliumoksalaattia ja kyllästettyä natriumkloridiliuosta, sekoita, lisää 100 ml asetonia, ravista 2 minuuttia. Lisää 100 ml kloroformia ja ravista 2 minuuttia. Suppilo jätetään, kunnes kerrokset ovat täysin eronneet. Ylempi faasi heitetään pois ja alempi faasi kaadetaan pyöreäpohjaiseen pulloon, jossa on jauhettu osa, ja liuotin haihdutetaan kuiviin. Jäännös pestään pois 30 ml:lla heksaania.

Maitotiiviste, 10-20 % kermaa. Lisää 10 g:aan tuotetta 10 ml kyllästettyä natriumkloridiliuosta ja kaada 150 ml:n erotussuppiloon. Seokseen lisätään 40 ml asetonia, ravistellaan 2 minuuttia, lisätään 60 ml kloroformia, ravistellaan 2-3 minuuttia ja jätetään, kunnes faasit erottuvat. Jatka seuraavaksi kuten määritettäessä torjunta-aineita maidosta.

Kondensoidut maitotuotteet. 10 g tuotetta laitetaan lasiin, kaada 10 ml vettä 45 - 50 asteen lämpötilassa. C, sekoita ja siirrä 150 ml:n erotussuppiloon, lisää 5 ml kaliumoksalaattia. Suppilon sisältö sekoitetaan, lisätään 80 ml asetonia ja ravistellaan 2-3 minuuttia. Lisää 100 ml kloroformia ja ravista 5-7 minuuttia. Faasien erotuksen jälkeen alempi faasi kaadetaan pyöreäpohjaiseen pulloon, liuottimet tislataan pois ja kuiva jäännös liuotetaan 30 ml:aan petrolieetteriä. Kuivat maitotuotteet. 3 g kuivia maitotuotteita (2 g kermaa) kaadetaan lasiin, lisätään 15 ml tislattua vettä 40 - 45 asteen lämpötilassa. C, sekoita ja siirrä erotussuppiloon, jonka tilavuus on 300 ml, lisää 5 ml kaliumoksalaattia ja kyllästettyä natriumkloridiliuosta. Suppilon sisältö sekoitetaan, lisätään 80 ml asetonia ja ravistellaan 3 - 5 minuuttia, lisätään 100 ml kloroformia, ravistellaan 5 minuuttia ja jätetään 3 - 5 minuutiksi (faasien erottumiseen asti). Alempi faasi kaadetaan pyöreäpohjaiseen pulloon, liuotin tislataan pois ja jäännös pestään pois 30 ml:lla heksaania. Smetana, 30-40 % kermaa. 5 g tuotetta punnitaan lasiin, lisätään 10 ml kyllästettyä natriumkloridiliuosta ja siirretään erotussuppiloon, jonka tilavuus on 150 ml. Lasi pestään 40 ml:lla asetonia, pesuvedet siirretään erotussuppiloon, jota ravistellaan 2-3 minuuttia, lisätään 70 ml kloroformia ja ravistellaan 2 minuuttia. Suppilo jätetään useiksi minuutiksi, kunnes faasit erottuvat, alempi faasi kaadetaan pulloon liuottimien tislaamiseksi pois, liuotin tislataan pois ja jäännös pestään pois 30 ml:lla heksaania.

Raejuustoa, juustoa. 10 g raejuustoa tai juustoraastetta jauhetaan 10 ml:lla kyllästettyä natriumkloridiliuosta ja siirretään 250-300 ml:n erotussuppiloon. Lisää 80 ml asetonia, ravista 2 minuuttia, lisää 100 ml kloroformia ja ravista uudelleen. Alempaa faasia käytetään analyysiin sen jälkeen, kun liuottimet on tislattu pois ja jäännös on liuotettu 30 °C:seen.
ml heksaania. Seuraavaksi maidon ja maitotuotteiden näytteistä otetut uutteet puhdistetaan maitorasvasta, joka on valmistettu toisen menetelmän mukaisesti. Tätä varten 30 ml uutetta levitetään kolonniin, jossa on 70 ml ASA-silikageeliä. Kun uute on imeytynyt sorbenttiin, torjunta-aine eluoidaan 110 ml:lla bentseenin ja heksaanin seosta suhteessa 3:8 25 - 30 ml:n erissä. Eluaatti kerätään 250-300 ml:n pyöreäpohjaiseen pulloon. 10 minuuttia sen jälkeen, kun viimeinen liuottimen osa on imeytynyt, sorbentti puristetaan pois kumipallolla. Puhdistuksen jälkeen liuottimet tislataan pois tyhjössä.
voita. Sulata 20 g voita vesihauteessa pyöreäpohjaisessa pullossa, lisää 50 ml asetonia, sekoita huolellisesti, kunnes rasva liukenee, lisää 10 ml jääkylmää tislattua vettä ja jäähdytä jäillä, kunnes rasva kovettuu (noin 30 minuuttia). ). Asetoniuute valutetaan ja toimenpide toistetaan vielä 2 kertaa. Yhdistetyistä uutteista pyöreäpohjaisessa pullossa asetoni tislataan pois vesihauteessa. Torjunta-aineet uutetaan jäljelle jääneestä vesiuutteesta heksaanilla kolmessa 10 ml:n erässä 5 minuutin aikana. Yhdistetyt heksaaniuutteet käsitellään erotussuppilossa rikkihapolla ja natriumsulfaatilla. Puhdistettu uute kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutetaan. Maaperä. Ilmakuiva maanäytteisiin (10 g), jotka on sijoitettu 250 ml:n erlenmeyerpulloihin, lisätään 10 ml 1-prosenttista ammoniumkloridin vesiliuosta ja jätetään suljettuna vuorokauden ajaksi. Lisää sitten seos, jossa on 30 ml asetonia ja 30 ml heksaania, ja ravista pulloja tunnin ajan ravistelulaitteella. Pullojen sisältö siirretään sentrifugiputkiin. Sentrifugoinnin jälkeen nestemäinen osa kaadetaan erlenmeyerpulloihin, maa-aines siirretään alkuperäisiin erlenmeyerpulloihin käyttäen 10 ml 1 % ammoniumkloridiliuosta ja 30 ml asetonia, lisätään 30 ml heksaania ja uuttaminen suoritetaan toiselle. 30 minuuttia. Sitten uutteet yhdistetään. Yhdistettyihin uutteisiin lisätään erotussuppilossa 180 ml tislattua vettä, ravistellaan kevyesti 5-7 minuuttia, nesteiden annetaan erottua ja alempi vesikerros kaadetaan erlenmeyerkolviin. Heksaanikerros johdetaan vedettömän natriumsulfaatin (ruokalusikallinen tai 30 - 40 g natriumsulfaattia) läpi. Vesi-asetonikerroksesta torjunta-aineiden uuttaminen suoritetaan vielä kahdesti 15 ja 10 ml:lla heksaania, joka sitten kuivataan saman natriumsulfaatin läpi. Heksaaniuutteet yhdistetään. Uutteiden väkevöinti suoritetaan joko pyörivällä tyhjiöhaihduttimella tai enintään 40 asteen kylpylämpötilassa. C ja tislausaika 9 - 11 minuuttia, tai pulloista, joissa on L-muotoinen ulostulo, vesihauteen lämpötilassa 72 - 75 astetta. C.

Väkevöityjen heksaaniuutteiden puhdistus maanäytteistä suoritetaan rikkihapolla, kuten edellä muille näytteille on kuvattu, ja liuotin haihdutetaan. Tupakka ja tupakkatuotteet. 5 g tupakkaa laitetaan 500 ml:n dekantterilasiin, kaadetaan 50 ml väkevää rikkihappoa ja sekoitetaan perusteellisesti lasisauvalla, kunnes näyte on täysin hiiltynyt. Lisää 10-15 minuutin kuluttua pulloon 25 ml heksaania, sekoita sisältö huolellisesti ja lisää 20 ml hiilitetrakloridia. Torjunta-aineiden uuttaminen näytteestä suoritetaan kolme kertaa 15 minuutin ajan, minkä jälkeen uute siirretään peräkkäin erotussuppiloon kerta- tai kaksinkertaista lisäpuhdistusta varten rikkihapolla.

Kromatografia.

Levitä kromatografialevylle 1,5 cm:n etäisyydellä sen reunasta testinäyte ruiskulla tai pipetillä yhteen kohtaan niin, että täplän halkaisija ei ylitä 1 cm. Loput pullossa olevasta uutteesta pestään pois kolmella annoksella (0,2 ml kukin) dietyylieetteriä, jotka levitetään ensimmäisen täplän keskelle. Näytteen oikealla ja vasemmalla puolella 2 cm:n etäisyydellä standardiliuokset, jotka sisältävät 10, 5, 1 μg koelääkkeitä (tai muita määriä lähellä havaittavia pitoisuuksia).

Levyjen liuoksia sisältävät levyt asetetaan kammioon kromatografia, jonka pohjalle 30 minuuttia ennen alkua Kromatografiaa varten kaadetaan liikkuva liuotin. Kun käytät levyjä, joissa on ohut kerros alumiinioksidia tai silikageeliä, n-heksaania käytetään liikkuvana liuottimena tai heksaanin ja asetonin seos suhteessa 6:1 lääkkeille, joiden R-arvo heksaanissa on alle 0,3. Käyttämällä f "Silufol"-levyt liikkuva liuotin - 1 % asetoniliuos in heksaani ja o-tolidiinilla kyllästetyt Silufol-levyt - heksaani dietyylieetterin kanssa suhteessa 49:1. Reuna levy sovelletut ratkaisut voidaan upottaa mobiiliin liuotin enintään 0,5 cm.

Kun liuotinrintama on kohonnut 10 cm, levy poistetaan kammiosta ja jätetään useita minuutteja liuotin haihtumaan. Seuraavaksi levyä kastellaan kehitysreagenssilla ja altistetaan UV-valolle 10 - 15 minuutiksi (PRK-4-lamppu). Levyt tulee sijoittaa 20 cm:n etäisyydelle valonlähteestä.

Klooriorgaanisten torjunta-aineiden läsnäollessa levylle ilmestyy harmaita mustia täpliä. Käytettäessä analysointiin o-tolidiinilla kyllästettyjä Silufol-levyjä, ne altistetaan UV-säteilylle useiden minuuttien ajan välittömästi kromatografian jälkeen. Klooriorgaanisten torjunta-aineiden läsnä ollessa sini-sinisiä täpliä ilmaantuu tässä tapauksessa. Kvantitatiivinen määritys suoritetaan vertaamalla näytteen ja standardiliuosten täpläpinta-alaa. Näytteessä olevan lääkkeen määrän, joka ei ylitä 20 μg, ja sen pisteen pinta-alan välillä on suora verrannollinen suhde. Jos lääkepitoisuus on suurempi, tulee käyttää suhteellista osaa tutkittavasta uutteesta.

Luku 4. MODERNI LAITTEISUUNNITTELU

JÄRJESTELMÄ OHUTKERROSKROMATOGRAFIAAN DENSITOMETRILLA "Denscan"

Tarkoitus ja laajuus

Ohutkerroskromatografia- ja elektroforeesijärjestelmät DenScan-densitometrillä on suunniteltu spektrin näkyvällä alueella olevien aineiden ja materiaalien näytteiden koostumuksen kvalitatiiviseen ja kvantitatiiviseen analysointiin sekä ultraviolettivalon aallonpituuksilla 254 ja 365 nm.

Soveltamisala: kemian, biokemian, biologian, lääketieteen, farmakologian, puhtaiden aineiden analyyttinen valvonta, ympäristökohteet jne.

Tekniset tiedot

· Tiheysmittari mahdollistaa parametrien laskennan ja kromatogrammien kvantitatiivisen arvioinnin spektrin näkyvällä ja ultraviolettialueella (lmax = 254 nm, lmax = 365 nm)

· Käsiteltyjen levyjen koko, cm................................. enintään 15 x 15

· Kuvan syöttöaika, s................................................................ .enintään 5

· Kromatogrammin mittausaika, min...................................................................5

· Signaali-kohinasuhde: näkyvä alue............ vähintään 5/1

· UV, 254 nm................................................ ..................................... vähintään 5/1

· UV, 365 nm................................................ ..... ................ vähintään 5/1

· Suhteellinen keskihajonta spot-alueen mukaan, %

· näkyvä alue................................................. ................... enintään 5

· UV, 254 nm................................................ ..................................... enintään 5

· UV, 365 nm................................................ ..................................... enintään 5

· Rf-arvojen alue: näkyvä alue........ enintään 0,02

· UV, 254 nm................................................ ..................... enintään 0,02

· UV, 365 nm................................................ ..... ............. enintään 0,02

· Valotuskammion paino, kg................................................. enintään 12 kg

· Valokammion kokonaismitat, mm... ei enempää pituus................................................. ........................... 420

leveys................................................. ................................ 420

korkeus................................................. ........................ 700

· Syöttöjännite, V................................. 220 ± 22/33

· AC-taajuus, Hz................................................ ...... 50 ± 1

· Keskimääräinen aika tiheysmittarin vikojen välillä, h... vähintään 5000

Densitometrin koostumus

DenScan-tiheysmittari koostuu valokamerasta, mustavalko- tai värivideokamerasta tai skannerista, kuvansyöttöyksiköstä ja tietojenkäsittelyjärjestelmästä.

Valaistuskammio on valmistettu lohkorakenteen muodossa, mukaan lukien seuraavat pääkomponentit:

Valon lähteet:

loistelamput

UV-lamput, aallonpituus 254 nm

UV-lamput, aallonpituus 365 nm

Korjaussuodattimien sarja

Ilmaisin - mustavalkoinen pienikokoinen videokamera OS-45D tai vastaava, jonka herkkyys ei ole huonompi kuin 0,02 luksia, manuaalisella tarkennuksella ja manuaalisella aukon säädöllä tai väriskanneri, jonka resoluutio on 200 d.p.i. ja uudemmat TWAIN-standardin mukaisella liitännällä

Levyjen asennuspöytä

Yhteyskanava kuvan syöttöyksikön kanssa

Tietojenkäsittelyjärjestelmä henkilökohtaisella tietokoneella ja Dens-ohjelmistolla. Tietokoneen vähimmäisvaatimukset:

Käyttöjärjestelmä - Microsoft Windows 95, Windows 98, Windows NT (versio 4.0 tai uudempi)

Prosessori - Pentium 100 MHz

Värimonitori - jonka lävistäjä on vähintään 14 tuumaa

Kiintolevytila ​​- 10 Mt

Manipulaattori - "hiiri"

Kuvansyöttöyksikkö video Blaster AverMedia ( ja sen ohjelmisto) käytetään kuvan saamiseksi kromatogrammista tietokoneen näytöllä. Samanlaisia ​​järjestelmiä on mahdollista käyttää.

Ohutkerroskromatografia (TLC) -levyt ja -levyt

Ruisku kromatografiaa varten MSh-50 (M-50) Ruisku kromatografiaa varten M-1N (MSh-1), M-5N (oppaan kanssa)

Ruisku kromatografiaa varten MSh-10 (M-10N), MSh-50 (M-50N) (ruostumaton terästanko, ohjaimella)

Ruisku kromatografiaa varten MSh-10M (M-10) (ruostumaton terästanko, rekyylikytkimellä) 10

Kirjallisuus

1. Kirchner Yu Ohutkerroskromatografia. M.: Mir, 1981.

2. Kromatografia ohuissa kerroksissa / Ed. E. Stahl. M.: Mir, 1965.

3. Evgeniev M.I., Evgenieva I.I., Moscow N.A., Levinson F.S. 5-kloori-4,6-dinitrobentsofuratsaani reagenssina aromaattisten amiinien ohutkerroskromatografiassa // Kasvi. lab. 1992. T. 58, nro 4. S. 11-13.

4. Nazarkina S.G. Polyaromaattisten hiilivetyjen määritys ympäristön kohteista neste- ja ohutkerroskromatografialla.

5. Sogolovsky B.M. Densitometri "Sorbfil" kvantitatiivista TLC:tä varten

6. Opas maan pintavesien kemialliseen analyysiin (toimittanut A.D. Semenov) // Leningrad: Gidrometeoizdat. - 1977. - 540 s.

7. Yhtenäiset vesianalyysimenetelmät. Muokannut Yu.Yu. Lurie // M.: Kemia. - 1973. - 376 s.

8. Lurie Yu.Yu. Teollisuus- ja jätevesien analyyttinen kemia. // M.: Kemia. - 1984. - 447 s.

9. V.D. Chmilin tila ja nykyaikaisten instrumentaalisten menetelmien käyttömahdollisuudet torjunta-aineiden analysointiin Ukrainassa

10. http://www.izme.ru/